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公开(公告)号：CN104805027B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201510278974.0
申请日：2015-05-27
申请人： 天津大学
摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，具体公开了一种重组耶氏解脂酵母菌株及其构建方法和应用。本发明所述重组耶氏解脂酵母菌株基因组包含SEQ ID NO:1‑3任意一项所示的核苷酸序列。本发明通过OE‑PCR方法构建单基因表达盒表达的菜油甾醇生物合成途径中关键基因dhcr7，用限制性内切酶将单基因表达盒切下并一次性转入酵母进行片段间的同源重组和基因组特定erg5位点的整合，通过营养缺陷型培养基和基因组PCR筛选完整组装的转化子，获得一种新颖的重组耶氏解脂酵母菌株，能够应用于菜油甾醇的生物合成中，并保持较高产量。
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公开(公告)号：CN104419718B
公开(公告)日：2017-07-07
申请号：CN201310386388.9
申请日：2013-08-29
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种酿酒酵母模块共转化组合筛选方法，步骤为：（1）每次从待筛选的启动子元件库、基因元件库和终止子元件库中各选一个元件组装到带有不同筛选标记的质粒上得到模块，不同的模块中，相同基因元件所选筛选标记相同，由模块组成模块库；（2）对模块库中的模块进行排列组合设计；（3）利用酿酒酵母质粒共转化技术，将与设计对应的模块转入酿酒酵母底盘菌中；（4）将转化后的菌在选择缺陷型培养基上培养，得到排列组合的正确酿酒酵母转化子；（5）结合目标性状的具体特征筛选得到高效模块组合的酿酒酵母转化子。本发明的方法极大的降低了工作量、提高了所构建系统的灵活性。得到的组合不用测序，降低了成本。
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公开(公告)号：CN104419718A
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310386388.9
申请日：2013-08-29
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种酿酒酵母模块共转化组合筛选方法，步骤为：（1）每次从待筛选的启动子元件库、基因元件库和终止子元件库中各选一个元件组装到带有不同筛选标记的质粒上得到模块，不同的模块中，相同基因元件所选筛选标记相同，由模块组成模块库；（2）对模块库中的模块进行排列组合设计；（3）利用酿酒酵母质粒共转化技术，将与设计对应的模块转入酿酒酵母底盘菌中；（4）将转化后的菌在选择缺陷型培养基上培养，得到排列组合的正确酿酒酵母转化子；（5）结合目标性状的具体特征筛选得到高效模块组合的酿酒酵母转化子。本发明的方法极大的降低了工作量、提高了所构建系统的灵活性。得到的组合不用测序，降低了成本。
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公开(公告)号：CN104419716B
公开(公告)日：2017-12-29
申请号：CN201310377238.1
申请日：2013-08-27
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法，包括如下步骤：（1）将源基因添加标准化位点形成基因元件，将基因元件连入质粒pLD‑Blunt中形成带有基因元件的质粒，进行序列验证；（2）从带有基因元件的质粒中调取基因元件，连入模块工具质粒中的如下缺口：终止子1‑启动子‑AATG‑缺口‑TAAA‑终止子2；构建出不同的功能模块的质粒；（3）从不同的功能模块的质粒中调取不同的功能模块，与经过酶切的酵母质粒载体共转化酿酒酵母，构建出标准化、高精度、通用的功能模块，存放于质粒中；本发明具有通用性、标准化、高精度、自由选择性。
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公开(公告)号：CN104805027A
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201510278974.0
申请日：2015-05-27
申请人： 天津大学
摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，具体公开了一种重组耶氏解脂酵母菌株及其构建方法和应用。本发明所述重组耶氏解脂酵母菌株基因组包含SEQ ID NO:1-3任意一项所示的核苷酸序列。本发明通过OE-PCR方法构建单基因表达盒表达的菜油甾醇生物合成途径中关键基因dhcr7，用限制性内切酶将单基因表达盒切下并一次性转入酵母进行片段间的同源重组和基因组特定erg5位点的整合，通过营养缺陷型培养基和基因组PCR筛选完整组装的转化子，获得一种新颖的重组耶氏解脂酵母菌株，能够应用于菜油甾醇的生物合成中，并保持较高产量。
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公开(公告)号：CN104419716A
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310377238.1
申请日：2013-08-27
申请人： 天津大学
摘要： 本发明公开了一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法，包括如下步骤：（1）将源基因添加标准化位点形成基因元件，将基因元件连入质粒pLD-Blunt中形成带有基因元件的质粒，进行序列验证；（2）从带有基因元件的质粒中调取基因元件，连入模块工具质粒中的如下缺口：终止子1-启动子-AATG-缺口-TAAA-终止子2；构建出不同的功能模块的质粒；（3）从不同的功能模块的质粒中调取不同的功能模块，与经过酶切的酵母质粒载体共转化酿酒酵母，构建出标准化、高精度、通用的功能模块，存放于质粒中；本发明具有通用性、标准化、高精度、自由选择性。
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