公开(公告)号：CN114107300A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111439159.X

申请日：2021-11-30

申请人： 宁夏医科大学

发明人： 杨延辉 ,  王大军 ,  杨丽 ,  唐静 ,  李晓雨 ,  马凯 ,  杨玉玛 ,  王琦 ,  林源 ,  马国荣 ,  马虹 ,  姚青 ,  黄凌 ,  张炜 ,  郭若莹 ,  赵艺卿

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/6858

摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas技术检测结核分枝杆菌利福平耐药性点突变的crRNA，本发明以MDR‑TB利福平耐药性点突变(rpoBL378D)为检测靶位点，设计并合成靶向该目的序列的crRNA；构建基于CRISPR/Cas的MDR‑TB利福平耐药性点突变检测手段，通过联合等温扩增技术和荧光报告子检测手段，实现快速、简便、低廉、高特异性、高灵敏度和可视化的核酸检测优势。本发明旨在开发结核病耐药性点突变检测平台，为TB的预防和治疗提供帮助，具有推广应用的价值。

公开(公告)号：CN113736788A

公开(公告)日：2021-12-03

申请号：CN202111126765.6

申请日：2021-09-19

申请人： 宁夏医科大学

发明人： 杨延辉 ,  林源 ,  田静 ,  何龙 ,  杨林 ,  王大军 ,  杨丽 ,  唐静 ,  李晓雨 ,  马凯 ,  杨玉玛 ,  刘河涛

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66

摘要： 本发明公开了一种高通量CRISPR基因编辑工具载体构建方法，包括如下步骤：S1、引物设计及合成；S2、引物退火；S3、sgRNA重组质粒构建；S4、转化得到24份2μl的混合物；S5、筛选单克隆；S6、质粒提取及测序。该方法优化了重组质粒的构建步骤和转化实验的孵育步骤，同时缩短了质粒构建和转化实验的时间提高了转化效率和阳性率，减少了实验成本，在筛选单克隆过程中替换了传统的涂布棒法，为最终实现自动化、高通量sgRNA载体构建奠定了基础；解决了酶切和连接的矛盾，将不可能统一的体系实现了统一，该方法不仅能够应用于基因编辑sgRNA的构建，还可以应用于载体构建的无缝克隆技术。

公开(公告)号：CN114107300B

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202111439159.X

申请日：2021-11-30

申请人： 宁夏医科大学

发明人： 杨延辉 ,  王大军 ,  杨丽 ,  唐静 ,  李晓雨 ,  马凯 ,  杨玉玛 ,  王琦 ,  林源 ,  马国荣 ,  马虹 ,  姚青 ,  黄凌 ,  张炜 ,  郭若莹 ,  赵艺卿

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/6858

摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas技术检测结核分枝杆菌利福平耐药性点突变的crRNA，本发明以MDR‑TB利福平耐药性点突变(rpoBL378D)为检测靶位点，设计并合成靶向该目的序列的crRNA；构建基于CRISPR/Cas的MDR‑TB利福平耐药性点突变检测手段，通过联合等温扩增技术和荧光报告子检测手段，实现快速、简便、低廉、高特异性、高灵敏度和可视化的核酸检测优势。本发明旨在开发结核病耐药性点突变检测平台，为TB的预防和治疗提供帮助，具有推广应用的价值。