重组人源LECT2蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化方法

    公开(公告)号:CN102559739B

    公开(公告)日:2014-06-25

    申请号:CN201210018774.8

    申请日:2012-01-20

    申请人: 宁波大学

    摘要: 本发明公开了重组人源LECT2蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化方法,特点是包括将人工合成的人源LECT2基因插入胞外表达载体pPICZαA中构建重组表达质粒的步骤;酶切线性化后电击导入毕赤酵母X33中,获得重组工程菌株的步骤;经过摇瓶发酵和甲醇诱导,实现重组人源LECT2蛋白的分泌表达的步骤;再利用柱层析进行纯化制备得到纯度为95%以上的重组人源LECT2蛋白的步骤,优点是首次提出了重组人源LECT2蛋白在毕赤酵母中得分泌表达和纯化制备方法,采用毕赤酵母大量表达高活性的重组人源LECT2蛋白,具有稳定、产量高、活性强等优势,可用于制药和诊断检测。

    鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测方法

    公开(公告)号:CN101768641A

    公开(公告)日:2010-07-07

    申请号:CN201010039806.3

    申请日:2010-01-19

    申请人: 宁波大学

    IPC分类号: C12Q1/68 C12R1/01

    摘要: 本发明公开了鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测方法,包括鳗利斯顿氏菌empA基因克隆和测序步骤,设计三对LAMP的引物FIP、BIP、LF、LB、F3、B3和一条探针Van-HP步骤,其中Van-FIP为5’端生物素标记引物,探针Van-HP为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针,配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤,对LAMP反应体系扩增步骤,用探针杂交然后用LFD检测步骤,本发明具有比现有技术的PCR检测鳗利斯顿氏菌的方法具有更高的灵敏度、特异性和便捷性,并且可以在实际生产中现场应用,有利于检测和控制水产动物养殖中鳗利斯顿氏菌的感染和暴发。

    用于鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测的引物和探针

    公开(公告)号:CN101768641B

    公开(公告)日:2012-12-26

    申请号:CN201010039806.3

    申请日:2010-01-19

    申请人: 宁波大学

    IPC分类号: C12Q1/68 C12R1/01

    摘要: 本发明公开了鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测方法,包括鳗利斯顿氏菌empA基因克隆和测序步骤,设计三对LAMP的引物FIP、BIP、LF、LB、F3、B3和一条探针Van-HP步骤,其中Van-FIP为5’端生物素标记引物,探针Van-HP为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针,配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤,对LAMP反应体系扩增步骤,用探针杂交然后用LFD检测步骤,本发明具有比现有技术的PCR检测鳗利斯顿氏菌的方法具有更高的灵敏度、特异性和便捷性,并且可以在实际生产中现场应用,有利于检测和控制水产动物养殖中鳗利斯顿氏菌的感染和暴发。

    一种可口革囊星虫多糖的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN103483462B

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201310433313.1

    申请日:2013-09-23

    申请人: 宁波大学

    摘要: 本发明公开了一种可口革囊星虫多糖的制备方法及可口革囊星虫多糖的应用,可口革囊星虫粉先灭内源酶,再通过枯草杆菌蛋白酶和Alacase蛋白酶组成的组合酶酶解,酶解液三级过滤后,真空浓缩干燥得到可口革囊星虫多糖,该制备方法制作简单,省却了脱蛋白工艺和乙醇醇沉工艺,缩短生产周期,有利于减排节能和保护环境,酶解效果仍较好,得到的可口革囊星虫多糖中多糖含量仍达到50~70%。该可口革囊星虫多糖具有抗败血症的作用。

    大黄鱼肝表达抗菌肽LEAP-2C在毕赤酵母中的胞内表达方法

    公开(公告)号:CN104031935A

    公开(公告)日:2014-09-10

    申请号:CN201410221810.X

    申请日:2014-05-23

    申请人: 宁波大学

    发明人: 陈炯 陆新江

    IPC分类号: C12N15/81 C12N15/12 C12R1/84

    摘要: 本发明公开了大黄鱼肝表达抗菌肽LEAP-2C在毕赤酵母中的胞内表达方法,特点是包括大黄鱼LEAP-2C基因(登录号:KJ024789)的重组表达载体构建的步骤;多拷贝表达盒LEAP-2C/pAO815构建的步骤;酶切线性化后电击导入毕赤酵母GS115中,经蛋白测定和重组子筛选,获得重组工程菌株;最后经过摇瓶发酵扩大培养和甲醇诱导,实现重组大黄鱼LEAP-2C的胞内表达的步骤,优点是表达水平高、生产成本低及产量高,大黄鱼LEAP-2C酵母表达产品可应用于水产养殖饲料添加剂和抗菌新药中。