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公开(公告)号：CN105368978B
公开(公告)日：2019-04-02
申请号：CN201510981307.9
申请日：2015-12-23
申请人： 中国人民解放军后勤工程学院 , 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
IPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12R1/645
摘要： 本发明提供一种检测喷气燃料污染真菌Khuskia oryzae的LAMP‑LFD检测方法，设计了三对LAMP引物FIP、BIP、LF、LB、F3和B3，其中FIP为5’端生物素标记引物，LF为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤，对LAMP反应体系进行扩增，然后用LFD试纸条检测。本发明LAMP‑LFD方法检测Khuskia oryzae相对于传统PCR方法，不仅做到了结果可视化，还具有特异性强、操作简单、耗时短、灵敏度高以及不依赖昂贵的特殊仪器的特点。运用本发明的方法对储备中的喷气燃料进行检测，能更好地提高了特征真菌污染喷气燃料的预警能力，这对保障喷气燃料质量及飞机的飞行安全有着重要的意义。
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公开(公告)号：CN104611439A
公开(公告)日：2015-05-13
申请号：CN201510052981.9
申请日：2015-02-02
申请人： 中国人民解放军后勤工程学院 , 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
CPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2565/625
摘要： 本发明提供一种检测喷气燃料中特征真菌Amorphotheca resinae的方法，设计了1套LAMP引物，建立了反应温度63℃，时间35min，LFD试纸条直接观察的检测体系，并随后进行了特异性和灵敏度评价。结果显示，应用LAMP-LFD方法对A.resinae基因组DNA和纯培养物检测最低检测线分别为26fg/μL和8cfu/mL；特异性验证实验中，用喷气燃料中曾发现的4株真菌，绿色木霉、绳状青霉菌、黑曲霉、出芽短梗霉和A.resinae作为特异性试验菌株，LAMP-LFD法检测只对A.resinae呈阳性反应。本发明的检测方法能快速检测喷气燃料中的A.resinae，且结果可视化。该方法耗时短、操作简便、特异性强、灵敏度高、不依赖特殊检测设备，作为一种全新的检测方法有望在将来用于检测喷气燃料中特征真菌A.resinae的实地现场检测。
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公开(公告)号：CN105695457B
公开(公告)日：2019-03-22
申请号：CN201610242249.2
申请日：2016-04-19
申请人： 中国人民解放军后勤工程学院 , 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
IPC分类号： C12N15/11 , C12Q1/6844 , C12Q1/04
摘要： 本发明提供一种局限青霉的检测方法，设计了三对LAMP引物FIP、BIP、LF、LB、F3和B3，其中FIP为5’端生物素标记引物，LF为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤，对LAMP反应体系进行扩增，然后用LFD试纸条检测，并随后进行了灵敏度和特异性评价。结果显示，应用LAMP‑LFD方法对局限青霉基因组DNA检测最低检测线为4.2fg/μL；特异性验证本发明只对局限青霉(P.restrictum)呈阳性反应。
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公开(公告)号：CN104818339B
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201510289271.8
申请日：2015-05-29
申请人： 舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心 , 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
摘要： 本发明提供一种检测油菜茎基溃疡病菌的LAMP‑LFD检测方法，设计了三对LAMP引物FIP、BIP、LF、LB、F3和B3，其中FIP为5’端生物素标记引物，LF为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤，对LAMP反应体系进行扩增，然后用LFD检测，并随后进行了特异性和灵敏度评价。结果显示，应用LAMP‑LFD方法对L.maculans基因组DNA检测最低检测线为114fg/μL；特异性验证实验中，用5株相关植物病原菌，链格孢属、龙眼焦腐病菌、镰刀菌属、大豆北方茎基溃疡病菌，大豆南方茎基溃疡病菌和L.maculans作为特异性试验菌株，LAMP‑LFD法检测只对L.maculans呈阳性反应。
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公开(公告)号：CN105039149B
公开(公告)日：2017-11-17
申请号：CN201510427820.3
申请日：2015-07-20
申请人： 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司 , 北京博奥晶典生物技术有限公司
摘要： 本发明涉及一种快速鉴定核酸扩增产物的密闭实验系统装置，其特征在于：包括从上至下依次套设的反应管、取样混样器和反应指示盒，其中反应管，具有可密闭的管盖；取样混样器中部具有能割破反应管的切割物，反应指示盒中部具有尖锐凸起物，反应指示盒尾端具有能容纳侧向层析试纸条的容腔，本发明还涉及密闭实验系统装置在环介导等温扩增与核酸侧向层析流动试纸条结合快速检测靶核酸扩增产物方法中的应用，与现有技术相比，本发明能避免靶核酸扩增产物释放空气中形成严重的气溶胶污染，扩增产物在这个完全密闭的装置内可以利用反应指示盒内的核酸侧向层析流动试纸条进行荧光检测，具有直观可视化，快速的优势和便捷，非常值得在现场推广和应用。
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公开(公告)号：CN103525889B
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310471179.4
申请日：2013-10-11
申请人： 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
摘要： 发明的目的是提供一种Cilengitide的新型的合成方法，即利用硫酯酶（TE）介导的化学酶法催化合成抗肿瘤化合物Cilengitide，在提高了合成效率的同时又降低合成成本。本发明的合成方法与传统的化学合成法相比，在催化时间上缩短了48倍，由原先的32h（化学法）缩短为40min。在得率上由先前的27.2%，提高到了79.3%。因此，该方法使用可以大幅度的提高Cilengtide的合成效率，降低合成成本。
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公开(公告)号：CN104278081A
公开(公告)日：2015-01-14
申请号：CN201310297797.1
申请日：2013-07-03
申请人： 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
CPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2563/131
摘要： 本发明的目的是提供一种用LAMP-LFD芯片高通量检测微囊藻毒素的方法，以实现对微囊藻毒素基因进行快速、安全、特异、灵敏、简便的现场检测，克服已有用实验室都采用细胞毒性实验法、化学分析法、ELISA及PPIA方法来检测微囊藻毒素不能在现场应用的问题，从而弥补现有技术的不足。反应结果可以直接肉眼判定等优点适合各类试剂检测反应，特别适合现场以及野外的检测需要。本发明结合微囊藻毒素合成基因簇中，负责合成微囊藻毒素生物活性表达所必需的D-Glu的mcyE基因的种间同源区域设计用于LMAP扩增的引物。并利用研发的LAMP-LFD芯片集成装置进行微囊藻毒素基因的检测。
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公开(公告)号：CN104611439B
公开(公告)日：2016-08-10
申请号：CN201510052981.9
申请日：2015-02-02
申请人： 中国人民解放军后勤工程学院 , 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
摘要： 本发明提供一种检测喷气燃料中特征真菌Amorphotheca resinae的方法，设计了1套LAMP引物，建立了反应温度63℃，时间35min，LFD试纸条直接观察的检测体系，并随后进行了特异性和灵敏度评价。结果显示，应用LAMP?LFD方法对A.resinae基因组DNA和纯培养物检测最低检测线分别为26fg/μL和8cfu/mL；特异性验证实验中，用喷气燃料中曾发现的4株真菌，绿色木霉、绳状青霉菌、黑曲霉、出芽短梗霉和A.resinae作为特异性试验菌株，LAMP?LFD法检测只对A.resinae呈阳性反应。本发明的检测方法能快速检测喷气燃料中的A.resinae，且结果可视化。该方法耗时短、操作简便、特异性强、灵敏度高、不依赖特殊检测设备，作为一种全新的检测方法有望在将来用于检测喷气燃料中特征真菌A.resinae的实地现场检测。
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公开(公告)号：CN105368978A
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201510981307.9
申请日：2015-12-23
申请人： 中国人民解放军后勤工程学院 , 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司
CPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2565/625
摘要： 本发明提供一种检测喷气燃料污染真菌Khuskia oryzae的LAMP-LFD检测方法，设计了三对LAMP引物FIP、BIP、LF、LB、F3和B3，其中FIP为5’端生物素标记引物，LF为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤，对LAMP反应体系进行扩增，然后用LFD试纸条检测。本发明LAMP-LFD方法检测Khuskia oryzae相对于传统PCR方法，不仅做到了结果可视化，还具有特异性强、操作简单、耗时短、灵敏度高以及不依赖昂贵的特殊仪器的特点。运用本发明的方法对储备中的喷气燃料进行检测，能更好地提高了特征真菌污染喷气燃料的预警能力，这对保障喷气燃料质量及飞机的飞行安全有着重要的意义。
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公开(公告)号：CN104862206A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201410059786.4
申请日：2014-02-21
申请人： 宁波大学 , 宁波博奥生物工程有限公司 , 宁波检验检疫科学技术研究院
IPC分类号： C12M1/00
摘要： 一种用于多重多靶点核酸全过程密闭加样的装置系统，其特征在于：所述装置系统包括与离心机相连接实现均匀混料的混合均匀器、分样器和取样器，混合均匀器、分样器和取样器从内至外依次组装形成一带放射线的圆盘状结构，混合均匀器为圆盘形，其上端设有至少一个加样口，其内设有多个混合分割槽，其外周分布有多个分配口，分配口上设有贯通的细孔，分配口通过接头与分样器前端的分样口相连接，分样器的后端与取样器相连，在分样器内设有毛细管道，毛细管道的一端与分样口相连通，另一端与取样器的反应池相连通。本发明结构简单合理、密封性好、成本低，且操作灵活、简单方便，从加样到热合剪断分离完成不超过5min，可实现工业化生产。
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