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公开(公告)号：CN107164400B
公开(公告)日：2020-07-07
申请号：CN201710485003.2
申请日：2017-06-22
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种新的产茶叶碱和咖啡碱的重组基因工程菌及其构建方法和应用，本发明主要利用以黄嘌呤为甲基受体的咖啡碱合成代谢途径，将茶树咖啡碱合成酶基因TCS1和酵母鸟嘌呤脱氨酶基因GUD1共同导入大肠杆菌中，构建获得一种能在体外发酵生产茶叶碱和咖啡碱的重组大肠杆菌工程菌。该工程菌能在不添加任何底物的条件下，同时高产茶叶碱和咖啡碱，产量分别达到4.17mg/L和20.3mg/L，且产物在发酵液中，易分离纯化，具有良好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN105861408B
公开(公告)日：2019-11-19
申请号：CN201610475914.2
申请日：2016-06-22
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明提供一种发酵生产咖啡碱的工程菌，所述工程菌是通过将咖啡碱生物合成途径中的关键酶基因导入谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)构建而成的重组谷氨酸棒状杆菌。本发明通过过量表达咖啡碱合成途径中的关键酶基因，使谷氨酸棒状杆菌具备生产咖啡碱的能力，且产物咖啡碱能够大量分泌到胞外，分离纯化步骤少，咖啡碱的得率高，摇瓶发酵结果显示，咖啡碱的产量达3.75mg/L，表明该重组工程菌具有良好的工业应用前景，为利用谷氨酸棒状杆菌发酵生产食品安全级咖啡碱奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN107164400A
公开(公告)日：2017-09-15
申请号：CN201710485003.2
申请日：2017-06-22
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种新的产茶叶碱和咖啡碱的重组基因工程菌及其构建方法和应用，本发明主要利用以黄嘌呤为甲基受体的咖啡碱合成代谢途径，将茶树咖啡碱合成酶基因TCS1和酵母鸟嘌呤脱氨酶基因GUD1共同导入大肠杆菌中，构建获得一种能在体外发酵生产茶叶碱和咖啡碱的重组大肠杆菌工程菌。该工程菌能在不添加任何底物的条件下，同时高产茶叶碱和咖啡碱，产量分别达到4.17mg/L和20.3mg/L，且产物在发酵液中，易分离纯化，具有良好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN106085941A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610475884.5
申请日：2016-06-22
Applicant: 安徽农业大学
CPC classification number: C12N9/1007 , C12P17/182 , C12Y201/0116
Abstract: 本发明提供一种提高重组谷氨酸棒状杆菌发酵生产咖啡碱产量的方法，以含有咖啡碱生物合成途径中关键酶基因CaXMT和TCS1的重组谷氨酸棒状杆菌作为发酵菌株，通过向发酵液中添加前体物质黄嘌呤核苷，并采用加压方式对重组菌细胞进行通透化处理，促进重组工程菌对底物黄嘌呤核苷的吸收，在表达的活性蛋白的催化作用下，使底物黄嘌呤核苷经过三次甲基化反应和一次核苷水解反应，最终生成咖啡碱。本发明通过改变细胞的通透性，促进底物的吸收，操作步骤简单、产品纯度高，为利用微生物工业化发酵生产咖啡碱奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN105861408A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610475914.2
申请日：2016-06-22
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明提供一种发酵生产咖啡碱的工程菌，所述工程菌是通过将咖啡碱生物合成途径中的关键酶基因导入谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)构建而成的重组谷氨酸棒状杆菌。本发明通过过量表达咖啡碱合成途径中的关键酶基因，使谷氨酸棒状杆菌具备生产咖啡碱的能力，且产物咖啡碱能够大量分泌到胞外，分离纯化步骤少，咖啡碱的得率高，摇瓶发酵结果显示，咖啡碱的产量达3.75mg/L，表明该重组工程菌具有良好的工业应用前景，为利用谷氨酸棒状杆菌发酵生产食品安全级咖啡碱奠定了理论基础。
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