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公开(公告)号：CN106478777B
公开(公告)日：2018-03-02
申请号：CN201610867193.X
申请日：2016-09-29
申请人： 安徽农业大学
摘要： 本发明涉及具有免疫保护性的金黄色葡萄球菌FnBPA‑A蛋白的模拟表位肽、模拟表位肽组合物及其应用。本发明提供的2个免疫保护性模拟表位肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，而模拟表位肽组合物则由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的2种多肽组成，且SEQ ID NO:1所示多肽与SEQ ID NO:2所示多肽的质量配比为2:1。实验动物免疫保护性试验表明，本发明的2个模拟表位肽能够刺激机体产生高水平的特异性抗体，具有一定程度的免疫保护性，并且模拟表位肽组合物对黄色葡萄球菌感染的免疫保护效果好于FnBPA‑A全蛋白。因此，本发明的模拟表位肽及其组合物可作为有效成分，用于金黄色葡萄球菌多表位疫苗的开发，预防金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎。
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公开(公告)号：CN107523542B
公开(公告)日：2019-06-25
申请号：CN201710816631.4
申请日：2017-09-12
申请人： 安徽农业大学
IPC分类号： C12N5/0786
摘要： 本发明涉及一种草鱼肠巨噬细胞的分离、纯化与原代培养方法。分离方法为：无菌操作取出肠道中后段，除去肠道外脂肪与肠系膜，纵向剖开肠管清除粪便，使用无菌弯头镊子刮除草鱼肠黏液与上皮细胞层，刮除时间15min；将除去黏液和上皮细胞层的肠段处理成碎块置于胶原酶IV消化液中消化，获得固有层单细胞悬液；再用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞。纯化方法为：采用差异贴壁法纯化肠巨噬细胞。原代培养方法为：用含草鱼自体血清的RPMI 1640完全培养液培养肠巨噬细胞，待细胞贴壁后用含脂多糖的RPMI 1640完全培养液换液一次，以后每隔2天换液一次，细胞至少可存活20天。本发明建立了一种可操作性强、重复性好的草鱼肠巨噬细胞分离、纯化和原代培养方法。
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公开(公告)号：CN107523542A
公开(公告)日：2017-12-29
申请号：CN201710816631.4
申请日：2017-09-12
申请人： 安徽农业大学
IPC分类号： C12N5/0786
CPC分类号： C12N5/0645 , C12N2500/34 , C12N2509/10
摘要： 本发明涉及一种草鱼肠巨噬细胞的分离、纯化与原代培养方法。分离方法为：无菌操作取出肠道中后段，除去肠道外脂肪与肠系膜，纵向剖开肠管清除粪便，使用无菌弯头镊子刮除草鱼肠黏液与上皮细胞层，刮除时间15min；将除去黏液和上皮细胞层的肠段处理成碎块置于胶原酶IV消化液中消化，获得固有层单细胞悬液；再用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞。纯化方法为：采用差异贴壁法纯化肠巨噬细胞。原代培养方法为：用含草鱼自体血清的RPMI 1640完全培养液培养肠巨噬细胞，待细胞贴壁后用含脂多糖的RPMI 1640完全培养液换液一次，以后每隔2天换液一次，细胞至少可存活20天。本发明建立了一种可操作性强、重复性好的草鱼肠巨噬细胞分离、纯化和原代培养方法。
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公开(公告)号：CN106478777A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201610867193.X
申请日：2016-09-29
申请人： 安徽农业大学
CPC分类号： C07K7/08 , A61K39/085 , A61K2039/55566 , C07K2319/00 , C40B30/04
摘要： 本发明涉及具有免疫保护性的金黄色葡萄球菌FnBPA-A蛋白的模拟表位肽、模拟表位肽组合物及其应用。本发明提供的2个免疫保护性模拟表位肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，而模拟表位肽组合物则由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的2种多肽组成，且SEQ ID NO:1所示多肽与SEQ ID NO:2所示多肽的质量配比为2:1。实验动物免疫保护性试验表明，本发明的2个模拟表位肽能够刺激机体产生高水平的特异性抗体，具有一定程度的免疫保护性，并且模拟表位肽组合物对黄色葡萄球菌感染的免疫保护效果好于FnBPA-A全蛋白。因此，本发明的模拟表位肽及其组合物可作为有效成分，用于金黄色葡萄球菌多表位疫苗的开发，预防金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎。
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