公开(公告)号：CN112921048B

公开(公告)日：2022-03-08

申请号：CN202110244068.4

申请日：2021-03-05

申请人： 安徽工程大学

发明人： 刘艳 ,  李伟 ,  吴静 ,  薛正莲 ,  王洲 ,  胡刘秀 ,  胡汶松 ,  周梦洁 ,  胡紫微 ,  赵礼军

IPC分类号： C12N15/75 ,  C12N15/66 ,  C12N15/57 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

摘要： 本发明提供了一种纳豆激酶工程菌及提高纳豆激酶活力的方法，包括如下步骤：步骤一、分别提取枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的基因组DNA；步骤二、以转录调控因子sinR和纳豆激酶编码基因aprN为目的基因，以枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的DNA为模板，分别设计第一引物对和第二引物对进行PCR扩增，以得到sinR PCR产物和aprN PCR产物；步骤三、以sinR PCR产物和aprN PCR产物构建串联sinR与aprN的重组质粒；步骤四、将重组质粒转化感受态细胞，以得到阳性克隆菌落；步骤五、对阳性克隆菌落依次进行种子培养基培养和发酵培养。本发明将群体感应调控因子与纳豆激酶编码基因串联表达，提高纳豆激酶含量及活力。

公开(公告)号：CN112921048A

公开(公告)日：2021-06-08

申请号：CN202110244068.4

申请日：2021-03-05

申请人： 安徽工程大学

发明人： 刘艳 ,  李伟 ,  吴静 ,  薛正莲 ,  王洲 ,  胡刘秀 ,  胡汶松 ,  周梦洁 ,  胡紫微 ,  赵礼军

IPC分类号： C12N15/75 ,  C12N15/66 ,  C12N15/57 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

摘要： 本发明提供了一种纳豆激酶工程菌及提高纳豆激酶活力的方法，包括如下步骤：步骤一、分别提取枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的基因组DNA；步骤二、以转录调控因子sinR和纳豆激酶编码基因aprN为目的基因，以枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的DNA为模板，分别设计第一引物对和第二引物对进行PCR扩增，以得到sinR PCR产物和aprN PCR产物；步骤三、以sinR PCR产物和aprN PCR产物构建串联sinR与aprN的重组质粒；步骤四、将重组质粒转化感受态细胞，以得到阳性克隆菌落；步骤五、对阳性克隆菌落依次进行种子培养基培养和发酵培养。本发明将群体感应调控因子与纳豆激酶编码基因串联表达，提高纳豆激酶含量及活力。