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公开(公告)号：CN117402817B
公开(公告)日：2024-09-27
申请号：CN202311426507.9
申请日：2023-10-31
申请人： 山东丽山生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/071 , C12N15/867
摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种无血清培养驯化贴壁293T细胞的方法及其应用。包括以下步骤：将DMEM完全培养基培养的293T细胞接种至混合培养基中进行培养，得到混合培养基培养的293T细胞；其中所述混合培养基的组成为：含血清培养基和无血清培养基，所述含血清培养基和无血清培养基的体积比为4:1~1:3；将所述混合培养基培养的293T细胞接种至无血清培养基中进行培养，得到LS293T贴壁细胞，其中所述无血清培养基中包含贴附因子；所述贴附因子为重组人纤连蛋白。本发明得到的LS293T贴壁细胞在细胞活性、倍增时间方面与驯化前无差异。在慢病毒包装应用中，LS293T贴壁细胞兼具无血清培养和纯化压力小的优势。
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公开(公告)号：CN118465250A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410911120.0
申请日：2024-07-09
申请人： 丽山健康(山东)集团有限公司 , 山东丽山生物科技有限公司
IPC分类号： G01N33/50
摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，具体提供了一种CAR‑NK细胞应用方法：无菌环境下，在100uL的CAR‑NK细胞注射液中加入0.11~0.14倍质量的中药提取物并混匀得到待用注射液，给予待用注射液2.4μm波长的红外辐射12h后静脉注射入带瘤裸鼠体内。本发明特定波长的红外辐射能在不引起显著热效应的情况下，配合本发明的中药提取物，促进CAR‑NK细胞生长代谢，改善CAR‑NK细胞的能量供应，有助于CAR‑NK细胞的增殖。
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公开(公告)号：CN117660373A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311696714.6
申请日：2023-12-12
申请人： 山东丽山生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种慢病毒大规模纯化方法及其应用。应用包括：1）使用293T细胞进行慢病毒包装；2）收集经步骤1）包装的慢病毒上清液，对其进行过滤处理去除细胞杂质获得慢病毒澄清液；3）对慢病毒澄清液进行切向流超滤装置浓缩换液获得超滤浓缩液；4）先采用复合模式层析填料Capto Core 700对超滤浓缩液进行纯化得到慢病毒料液，再对所述慢病毒料液进行离子交换填料Capto Q Impres层析纯化得到慢病毒溶液；5）慢病毒溶液进行超滤换液处理；6）经超滤换液后的慢病毒溶液使用滤器过滤除菌，得到纯化后的慢病毒。本发明的方法保证了慢病毒在纯化过程中保持最大活性，提高了回收率和滴度。
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公开(公告)号：CN118389429B
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410851872.2
申请日：2024-06-28
申请人： 丽山健康(山东)集团有限公司 , 山东丽山生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/0783 , C12N13/00
摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，具体提供了一种NK细胞制备方法为以下步骤：步骤一：将外周血混合抗凝剂后离心，弃上层血浆得剩余血样，再加所述剩余血样等质量的生理盐水并混匀得稀释血样，加至淋巴分离液离心管中，离心后将白膜层吸取至新离心管中，补加生理盐水，离心后弃上清，补加生理盐水重悬，之后离心后弃上清得外周血单个核细胞；步骤二：将所述外周血单个核细胞取样计数后用培养液稀释，给予红外辐射并培养4d后取样计数，再添加所述培养液稀释给予红外辐射并3d后取样计数。本发明创造性的结合了红外‑中药体系来促进NK细胞的增殖，本发明特定的红外辐射和中药配比是配合本发明整体方案来起作用的。
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公开(公告)号：CN118465251A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410921130.2
申请日：2024-07-10
申请人： 丽山健康(山东)集团有限公司 , 山东丽山生物科技有限公司
IPC分类号： G01N33/50
摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，具体提供了一种CAR‑T细胞应用方法：无菌环境下，在100uL的CAR‑T细胞注射液中加入1.8~2.2倍质量的中药提取物并混匀后静脉注射入带瘤裸鼠体内。本发明特定配比的雷公藤、黄芩、粉防己、芍药和枸杞子对CAR‑T细胞应用造成的IL‑6炎性因子的过度表达有协同的调节效果。
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公开(公告)号：CN117384858A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311695326.6
申请日：2023-12-12
申请人： 山东丽山生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/10 , C12N5/0783 , C12N15/867 , A61K39/00 , A61K35/17 , A61P35/00 , A61P37/08 , A61P37/02 , A61P31/00
摘要： 本发明涉及免疫技术领域，具体涉及一种嵌合抗原受体T细胞的制备方法及其应用。方法包括：（1）激活T细胞，T细胞激活17~19 h后采用完全培养基调整细胞密度106/ml，向完全培养基中加入慢病毒8~9× ，同时加入聚凝胺，对激活后的T细胞进行培养；（2）培养6~8 h后加入完全培养基以稀释聚凝胺据计数结果补液，继续培养，；调整细胞密度至（3）培养至第3~51天×，10每天进行取样计数6/ml继续培养。（4），根培养至第细胞密度至5~11天1×，每10486/ml h继续培养进行取样计数。本发明的方法可以提高，根据计数结果补液，T调整细胞嵌合抗原受体基因转导效率。
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公开(公告)号：CN117384815A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311399044.1
申请日：2023-10-26
申请人： 山东丽山生物科技有限公司
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/64 , C12N15/867 , C12R1/19
摘要： 本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种提高质粒发酵产量的发酵方法及其应用。方法包括：冷冻保存的含有目的质粒的菌种常温复苏后接种至培养基中，37℃培养至OD600为2.5~3，得到活化后的种子液；将发酵培养基加入发酵罐内，将第一补料培养基和第二补料培养基加入补料瓶内；将活化后的种子液接种至发酵罐内；设定初始发酵培养条件，在初始发酵培养条件下发酵至对数生长期后，降低发酵温度继续发酵的同时使用第一补料培养基进行间歇补料；发酵至对数生长中后期提高发酵温度、通入氧气的同时将第一补料培养基更换为第二补料培养基继续发酵，至发酵菌体OD值不再提高后结束发酵。实现了质粒产量的有效提升。
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公开(公告)号：CN118465251B
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202410921130.2
申请日：2024-07-10
申请人： 丽山健康(山东)集团有限公司 , 山东丽山生物科技有限公司
IPC分类号： G01N33/50
摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，具体提供了一种CAR‑T细胞应用方法：无菌环境下，在100uL的CAR‑T细胞注射液中加入1.8~2.2倍质量的中药提取物并混匀后静脉注射入带瘤裸鼠体内。本发明特定配比的雷公藤、黄芩、粉防己、芍药和枸杞子对CAR‑T细胞应用造成的IL‑6炎性因子的过度表达有协同的调节效果。
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公开(公告)号：CN118465250B
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202410911120.0
申请日：2024-07-09
申请人： 丽山健康(山东)集团有限公司 , 山东丽山生物科技有限公司
IPC分类号： G01N33/50
摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，具体提供了一种CAR‑NK细胞应用方法：无菌环境下，在100uL的CAR‑NK细胞注射液中加入0.11~0.14倍质量的中药提取物并混匀得到待用注射液，给予待用注射液2.4μm波长的红外辐射12h后静脉注射入带瘤裸鼠体内。本发明特定波长的红外辐射能在不引起显著热效应的情况下，配合本发明的中药提取物，促进CAR‑NK细胞生长代谢，改善CAR‑NK细胞的能量供应，有助于CAR‑NK细胞的增殖。
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