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公开(公告)号：CN102994445B
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201210541987.9
申请日：2012-12-14
申请人： 山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要： 发明涉及生物技术领域，更具体的讲是一种运用间接免疫荧光检测技术进行病毒敏感细胞克隆株筛选的方法，包括以下步骤：细胞系纯净性的鉴定；细胞系中单克隆细胞株的获得；单克隆细胞株对病毒敏感性的鉴定，本发明的有益效果是：本方法检测时间短，只需3天即可对单细胞克隆对病毒敏感性进行鉴定；操作相对简单，方法易行，可用于非致细胞病变型病毒敏感细胞株的大量筛选；结果稳定，可重复性强，与测定毒价方法效果一致。
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公开(公告)号：CN102988972B
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201210545873.1
申请日：2012-12-14
申请人： 山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要： 本发明涉及一种运用激流式生物反应器生产猪细小病毒灭活疫苗的方法，该方法是将猪细小病毒接种IBRS-2细胞，培养得到生产种毒；另外将IBRS-2细胞接种到激流式生物反应器中，然后将制备的猪细小病毒种毒接种到激流式生物反应器中培养的IBRS-2细胞，进行病毒的繁殖和培养；最后收获繁殖的病毒液，灭活，配苗即得猪细小病毒灭活疫苗。该方法使用激流式生物反应器和纸片载体避免了微载体生物反应器培养细胞产生的剪切力，进一步提高了细胞密度和活力，使细胞增殖病毒的能力增强。反应器能实时监控并自动调节细胞生长的最适条件，使每批收获的病毒液批间差异小，提高了疫苗质量稳定性、提高了生产效率、降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN106190909A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610575527.6
申请日：2016-07-21
申请人： 山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要： 本发明公开了一种副鸡嗜血杆菌B型株发酵培养基、其制备方法及其应用，属于农业微生物领域。本发明培养基包括：5-100g/L的酪蛋白胨、0.5-80g/L的酵母粉、0.5-80g/L的多价胨、0.5-20g/L的氯化钠、0.5-20g/L的谷氨酸钠、0.5-30g/L的葡萄糖、0.5-30g/L的鱼粉蛋白胨、5-100mL/L的鸡血凊、0.5-50mL/L的微量元素溶液、1-30mL/L的NAD溶液。本发明培养基中含有副鸡嗜血杆菌B型菌株生长所必须的各种营养成分，利于菌株生长代谢，缩短菌体适应期，接种后菌体适应能力强，发酵周期短，收获时活菌量高，适于规模应用，具有广阔前景。
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公开(公告)号：CN105925517B
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201610575429.2
申请日：2016-07-21
申请人： 山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要： 本发明公开了一种马链球菌兽疫亚种无血清厌氧高密度发酵培养工艺，属于农业微生物领域。本发明依次通过TSA复苏冻干种子、在TSA琼脂斜面一级中培养、在TSB培养基进行二级种子培养、在无血清和葡萄糖的加富胰酪蛋白培养基中厌氧发酵，得到马链球菌兽疫亚种发酵高密度抗原。本发明通过不添加任何血清和葡萄糖、厌氧发酵培养的方法，进行工业放大生产研究，发酵抗原含量无降低，发酵过程中不用调整通气、控制溶氧，抗原含量高，工艺参数容易控制，减少补料；较现有发酵工艺稳定、生长速度快，易于实现马链球菌抗原的大规模高密度培养。同时提高菌株的免疫原性，提高疫苗的保护效果。
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公开(公告)号：CN106190909B
公开(公告)日：2019-08-27
申请号：CN201610575527.6
申请日：2016-07-21
申请人： 山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要： 本发明公开了一种副鸡嗜血杆菌B型株发酵培养基、其制备方法及其应用，属于农业微生物领域。本发明培养基包括：5‑100g/L的酪蛋白胨、0.5‑80g/L的酵母粉、0.5‑80g/L的多价胨、0.5‑20g/L的氯化钠、0.5‑20g/L的谷氨酸钠、0.5‑30g/L的葡萄糖、0.5‑30g/L的鱼粉蛋白胨、5‑100mL/L的鸡血凊、0.5‑50mL/L的微量元素溶液、1‑30mL/L的NAD溶液。本发明培养基中含有副鸡嗜血杆菌B型菌株生长所必须的各种营养成分，利于菌株生长代谢，缩短菌体适应期，接种后菌体适应能力强，发酵周期短，收获时活菌量高，适于规模应用，具有广阔前景。
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公开(公告)号：CN105925517A
公开(公告)日：2016-09-07
申请号：CN201610575429.2
申请日：2016-07-21
申请人： 山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要： 本发明公开了一种马链球菌兽疫亚种无血清厌氧高密度发酵培养工艺，属于农业微生物领域。本发明依次通过TSA复苏冻干种子、在TSA琼脂斜面一级中培养、在TSB培养基进行二级种子培养、在无血清和葡萄糖的加富胰酪蛋白培养基中厌氧发酵，得到马链球菌兽疫亚种发酵高密度抗原。本发明通过不添加任何血清和葡萄糖、厌氧发酵培养的方法，进行工业放大生产研究，发酵抗原含量无降低，发酵过程中不用调整通气、控制溶氧，抗原含量高，工艺参数容易控制，减少补料；较现有发酵工艺稳定、生长速度快，易于实现马链球菌抗原的大规模高密度培养。同时提高菌株的免疫原性，提高疫苗的保护效果。
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公开(公告)号：CN103013930B
公开(公告)日：2014-07-23
申请号：CN201210545895.8
申请日：2012-12-14
申请人： 山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要： 本发明公开了一种新城疫、传染性支气管炎两种病毒同胚增殖培养的方法，使鸡新城疫、传染性支气管炎病毒在同胚接种，并且系统性调整了孵化温度、接种日龄、收胚时间和新城疫、传染性支气管炎两种病毒的浓度及比例，达到最优组合，经孵化、冷却、消毒等工序从鸡胚中收取尿囊液抗原。该方法提高了抗原收量，简化了生产步骤，节约了时间和原材料，降低了生产成本，并且操作更为快捷，具有较好的经济效益和社会效益，便于实施和推广应用。
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公开(公告)号：CN102988972A
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201210545873.1
申请日：2012-12-14
申请人： 山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要： 本发明涉及一种运用激流式生物反应器生产猪细小病毒灭活疫苗的方法，该方法是将猪细小病毒接种IBRS-2细胞，培养得到生产种毒；另外将IBRS-2细胞接种到激流式生物反应器中，然后将制备的猪细小病毒种毒接种到激流式生物反应器中培养的IBRS-2细胞，进行病毒的繁殖和培养；最后收获繁殖的病毒液，灭活，配苗即得猪细小病毒灭活疫苗。该方法使用激流式生物反应器和纸片载体避免了微载体生物反应器培养细胞产生的剪切力，进一步提高了细胞密度和活力，使细胞增殖病毒的能力增强。反应器能实时监控并自动调节细胞生长的最适条件，使每批收获的病毒液批间差异小，提高了疫苗质量稳定性、提高了生产效率、降低了生产成本。
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