一种壁蜕膜组织玻璃化冻存复苏方法

    公开(公告)号:CN118028213A

    公开(公告)日:2024-05-14

    申请号:CN202311862363.1

    申请日:2023-12-29

    IPC分类号: C12N5/071 A01N1/02

    摘要: 本发明公开了一种壁蜕膜组织玻璃化冻存复苏方法,包括以下步骤:采集胎盘组织,从所述胎盘组织上分离壁蜕膜组织;所述壁蜕膜组织与玻璃化冻存液混合,然后分装至冻存管内,在程序降温仪内设置装有液氮的凹槽,所述凹槽上方设置有冻存管架,将所述冻存管放置于所述冻存管架上,使液氮没过所述壁蜕膜组织但没有没过所述冻存管的管口,所述程序降温仪开始降温,所述冻存管的管内温度低于‑140℃时完成冷冻,将冷冻后的冻存管置于液氮罐中储存;将冷冻的壁蜕膜组织从冻存管中取出,在36℃~37℃温度下解冻,利用无血清培养基进行清洗,完成冷冻的壁蜕膜组织的复苏。本发明提供的壁蜕膜组织玻璃化冻存复苏方法能够缩短冷冻时间,避免组织直接接触液氮带来的污染风险,降低冷冻对组织的损伤。

    外周血单个核细胞的分离方法
    4.
    发明公开

    公开(公告)号:CN110551686A

    公开(公告)日:2019-12-10

    申请号:CN201910836499.2

    申请日:2019-09-05

    IPC分类号: C12N5/078

    摘要: 本发明提供一种外周血单个核细胞的分离方法,涉及再生医学领域。本发明的分离方法包括以下步骤:预处理:将采集的外周血进行离心,分离上层血液和下层血细胞,将下层血细胞与羟乙基淀粉溶液混合,混合均匀后放置沉降,去除沉降后的上清液,保留下层沉淀;分离:向下层沉淀中加入红细胞裂解液,混合均匀,离心,取细胞沉淀,加入PBS重悬,将细胞悬液加入到淋巴细胞分离液中,离心,去除上清液,保留细胞沉淀,加入PBS、肝素和人血白蛋白,混合,离心,得到PBMC细胞沉淀;培养:用培养基重悬PBMC细胞沉淀,分装至培养瓶中进行培养。采用本发明的方法,分离的外周血单个核细胞的数量多、纯度高、活性高。

    一种羊水间充质干细胞分化为神经干细胞的方法

    公开(公告)号:CN109385399A

    公开(公告)日:2019-02-26

    申请号:CN201811148883.5

    申请日:2018-09-29

    IPC分类号: C12N5/0797 C12N5/0775

    摘要: 本发明提供了一种羊水间充质干细胞分化为神经干细胞的方法,其包括以下步骤:离心分离羊水组织中的干细胞,得到羊水间充质干细胞;用羊水间充质干细胞无血清增殖培养基培养羊水间充质干细胞;传代至P3代羊水间充质干细胞;用胰蛋白酶消化P3代羊水间充质干细胞,得到单细胞悬液,培养过夜;去除羊水间充质干细胞无血清增殖培养基,然后清洗,再加入第一诱导培养基诱导培养;去除第一诱导培养基,然后用胰蛋白酶消化得到单细胞悬液,使用第二诱导培养基接种培养,得到神经干细胞形成的细胞球。本发明使用了多种特异性细胞因子,通过两步法将羊水间充质干细胞诱导得到神经干细胞,所得到的神经干细胞具备神经干细胞的成球生长特性。

    一种壁蜕膜间充质干细胞的制备方法、复苏方法

    公开(公告)号:CN113136364B

    公开(公告)日:2022-05-03

    申请号:CN202110392680.6

    申请日:2021-04-13

    IPC分类号: C12N5/0775 A01N1/02

    摘要: 本发明公开了一种壁蜕膜间充质干细胞的制备方法、复苏方法,其中,所述制备方法包括采用含有体积浓度40~60%Tryple‑EDTA酶和8~12mg/mlⅡ型胶原酶的高糖DMEM培养基作为组织消化液来消化组织块,有利于壁蜕膜间充质干细胞爬出组织进行贴壁生长;采用含有体积浓度8~12%血清替代物、0.5~1mol/ml L‑谷氨酰胺、18~25ng/ml碱性成纤维细胞生长因子、16~22ng/ml表皮生长因子和6~12ng/ml干细胞生长因子的DMEM无血清培养基作为选择培养基来终止消化,以及重悬从壁蜕膜间充质干细胞,有利于提高壁蜕膜间充质干细胞纯度,加速壁蜕膜间充质干细胞生长,实现壁蜕膜间充质干细胞的体外快速扩增。

    评估人脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分泌TNF-α的方法

    公开(公告)号:CN110982786A

    公开(公告)日:2020-04-10

    申请号:CN201911293350.0

    申请日:2019-12-16

    摘要: 本发明涉及一种评估人脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分泌TNF-α的方法,属于干细胞与再生医学技术领域。该方法包括以下步骤:共培养:取T淋巴细胞,加入预先包被CD3抗体的小孔板中,再加入脐带间充质干细胞,共培养T淋巴细胞和脐带间充质干细胞,并向共培养体系加入CD28抗体和白介素2,共培养预定时间后,收集培养上清液;检测:分别通过ELISA法检测TNF-α含量,通过流式细胞术检测不同亚群T淋巴细胞分泌TNF-α的能力,通过qPCR检测TNF-α的表达量;评价:综合评价间充质干细胞的免疫调节能力。该方法能综合全面的评价脐带间充质干细胞对T淋巴细胞分泌TNF-α的抑制程度,可以更好的对使用间充质干细胞治疗因TNF-α含量升高而引起的自身免疫疾病进行指导,或对预后进行评估。