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公开(公告)号：CN107475296A
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201710470625.8
申请日：2017-06-20
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C12N15/863 , C12N15/66 , C12N15/34 , A61K39/235 , A61P31/14
CPC分类号： C07K14/005 , A61K39/12 , A61K2039/5256 , A61K2039/552 , C12N15/86 , C12N2710/10222 , C12N2710/10234 , C12N2710/24043
摘要： 本发明属于生物技术领域，主要涉及一种表达鸡4型腺病毒(FADV4)fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用。所述载体以pMD19T-Simple载体为基础，TA克隆位点插入FADV4fiber2基因、lacz基因，以及用于同源重组的鸡痘病毒的基因组复制非必须片段LTYB和RTYB。所述方法包括步骤如下：质粒pMD-TYB；构建质粒pMD22；构建质粒pMD22-lacz；构建中间载体pMD22-TYB-lacz；扩增FADV4 fiber2基因；构建重组鸡痘病毒转移载体pMD22-TYB-lacz-F4；将转移载体pMD22-TYB-lacz-F4与鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞，鉴定选出阳性，继续传代培养；鉴定重组鸡痘病毒的表达效果。本发明构建的重组鸡痘病毒转移载体为研制高效的表达鸡4型腺病毒的重组鸡痘病毒基因工程活载体疫苗奠定基础。
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公开(公告)号：CN105039587A
公开(公告)日：2015-11-11
申请号：CN201510188800.5
申请日：2015-04-20
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明公开了鉴别鸭腺病毒2型的引物对及试剂盒，该引物对核苷酸序列如SEQ ID NO:1~2所示。该对引物特异性强，可准确高效地鉴别出待检样品是否含有鸭腺病毒2型，而包括禽腺病毒、细小病毒、坦布苏、新城疫等在内的禽类病毒并不能扩增出DNA片段；灵敏度高，至少能检测出0.2558ng的样品DNA。本发明的引物及PCR检测试剂盒，检测时间短，整个PCR过程只需要2个小时左右；简便、经济、不需要购买昂贵的实验仪器及试剂，有利于及时发现病鸭是否感染该病毒，采取相应措施，避免造成更大的经济损失。
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公开(公告)号：CN103396958B
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201310296734.4
申请日：2013-07-15
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种草分枝杆菌及其免疫增强剂的制备方法，所述草分枝杆菌是通过以下步骤培养得到的：采用斜面培养基活化草分枝杆菌；采用种子培养基培养上述活化菌种得到种子液；按照3-6%的接种量（v/v）将上述种子液接种到发酵培养基中，通气培养48-50h，得到发酵液；所述免疫增强剂是将草分枝杆菌发酵液灭活，离心收集菌体，用PBS清洗2-3次，计算离心得到的菌体干重，再与适量PBS、0.5-1%SDS混合均匀，进行高压均质破碎，离心超滤制备后制备得到的。本发明所提供的草分枝杆菌生产方法工艺简单，培养周期短，有效降低生产成本。本发明制备的免疫增强剂既可单独使用，也可与其他疫苗、药物配伍使用来提高机体免疫力，且无毒副作用。
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公开(公告)号：CN105039586A
公开(公告)日：2015-11-11
申请号：CN201510188768.0
申请日：2015-04-20
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种检测鸭2型腺病毒的引物及试剂盒，该引物对核苷酸序列如SEQ ID NO:1~2所示，可对鸭2型腺病毒感染进行快速鉴别诊断，重复性好，定量准确，整个样品检测过程从DNA提取至结果得出仅需要2-3小时即可完成，方法简便易行，节省了时间和成本，提高了准确性，可同时进行高通量样品检测。
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公开(公告)号：CN103396958A
公开(公告)日：2013-11-20
申请号：CN201310296734.4
申请日：2013-07-15
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种草分枝杆菌及其免疫增强剂的制备方法，所述草分枝杆菌是通过以下步骤培养得到的：采用斜面培养基活化草分枝杆菌；采用种子培养基培养上述活化菌种得到种子液；按照3-6%的接种量（v/v）将上述种子液接种到发酵培养基中，通气培养48-50h，得到发酵液；所述免疫增强剂是将草分枝杆菌发酵液灭活，离心收集菌体，用PBS清洗2-3次，计算离心得到的菌体干重，再与适量PBS、0.5-1%SDS混合均匀，进行高压均质破碎，离心超滤制备后制备得到的。本发明所提供的草分枝杆菌生产方法工艺简单，培养周期短，有效降低生产成本。本发明制备的免疫增强剂既可单独使用，也可与其他疫苗、药物配伍使用来提高机体免疫力，且无毒副作用。
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公开(公告)号：CN107475297A
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201710471276.1
申请日：2017-06-20
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C12N15/863 , C12N15/66 , C12N15/34 , A61K39/235 , A61P31/20
摘要： 本发明属于生物技术领域，主要涉及一种表达鸭2型腺病毒(DADV2)fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用。所述载体在pMD19T-Simple载体TA克隆位点插入含有鸡痘病毒的早晚期启动子LP2EP2启动下的DADV2fiber2基因、P11启动子启动下的lacz基因，以及用于同源重组的鸡痘病毒的基因组复制非必须片段LTYB、RTYB。所述转移载体的构建方法，包括如下步骤：构建质粒pMD-TYB；构建质粒pMD22；构建质粒pMD22-lacz；构建中间载体pMD22-TYB-lacz；构建转移载体pMD22-TYB-lacz-DFB2；对所得转移载体pMD22-TYB-lacz-DFB2进行效果验证。本发明构建的重组鸡痘病毒转移载体为研制高效的表达鸭2型腺病毒的重组鸡痘病毒基因工程活载体疫苗奠定基础。
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公开(公告)号：CN107446951A
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201710470317.5
申请日：2017-06-20
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C12N15/863 , C12N15/90 , C12N7/01 , A61K39/295 , A61K39/275 , A61K39/235 , A61P31/20
摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体是指一种通过CRISPR/Cas9系统快速筛选重组鸡痘病毒的方法及其应用。所述方法步骤包括：设计靶基因的sgRNA双链寡核苷酸序列；将所述序列与线性化的质粒载体连接，得到sgRNA表达载体；将sgRNA表达载体、表达外源基因的重组鸡痘病毒质粒、鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)；纯化并验证纯化效果。本发明通过CRISPR/Cas9方法将重组鸡痘病毒筛选代次降低至3-4代，大大提高了疫苗生产的效率，操作简便，降低了生产成本。
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