公开(公告)号：CN115948437A

公开(公告)日：2023-04-11

申请号：CN202211633924.6

申请日：2022-12-19

申请人： 广东肇庆星湖生物科技股份有限公司 ,  肇东星湖生物科技有限公司

发明人： 张胜南 ,  吴子豪 ,  鲁立 ,  欧雅莉 ,  郭鹏程 ,  张织 ,  邓红梅 ,  李嫦 ,  宾桂青

IPC分类号： C12N15/66 ,  C12N15/63

摘要： 本发明提供了同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法。同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法包括如下步骤：S1001：在设计目的基因片段PCR扩增反应引物前，选取酶切位点A、酶切位点A1、酶切位点B、酶切位点B1作为载体构建的酶切位点。目标基因片段扩增完成后，对载体和片段分开进行双酶切；本发明的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法选用同样的限制性酶切位点，同样的引物设计方法，同样的酶切方法，连接更多的基因片段，不会因为接口处原有的酶切位点消失，出现不能被之前的同尾酶中的任意一个限制性内切酶所识别的现象。

公开(公告)号：CN118028327A

公开(公告)日：2024-05-14

申请号：CN202410236354.X

申请日：2024-03-01

申请人： 广东肇庆星湖生物科技股份有限公司

发明人： 张胜南 ,  吴子豪 ,  郭鹏程 ,  鲁立 ,  欧雅莉 ,  邓红梅 ,  张织 ,  李嫦

IPC分类号： C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供利用同源重组酶进行多基因片段克隆的方法，包括：选择载体MCS区的2个限制性内切酶位点A和B作为载体构建的限制性酶切位点；将限制性内切酶位点A进行单碱基突变获得突变序列A*；扩增第1个目的基因；利用限制性内切酶位点A和限制性内切酶位点B双酶切载体，将双酶切后的载体和第1个目的基因的扩增基因片段利用DNA同源重组酶进行重组得到新载体1；扩增第2个目的基因，然后与新载体1的酶切产物重组得到新载体2；参照前述式，依次扩增第3个～第n个目的基因，并和相应的载体双酶切产物通过DNA同源重组酶进行重组，得到最终的多基因片段；n≥3。该方法可以实现多基因片段的连接构建。