公开(公告)号：CN112430561A

公开(公告)日：2021-03-02

申请号：CN202011389348.6

申请日：2020-12-01

申请人： 广东肇庆星湖生物科技股份有限公司 ,  华南理工大学

发明人： 蔡友华 ,  郑穗平 ,  谢莹玉 ,  赵楠楠 ,  谢学敏 ,  余宇坚

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12R1/15

摘要： 本发明属于分子生物学技术领域，具体为一种适用于停滞棒杆菌的高效转化方法。其转化方法重点对停滞棒杆菌电转化条件进行系统优化，通过对培养基、电场强度等因素的系统优化，提高转化效率，从而实现对停滞棒杆菌基因组的编辑，达到构建目标工程菌的目的。控制起始光密度值OD 600nm参数为0.29～0.31，将上述种子液转接入优化后的感受态培养基中，在31～32℃，249～252rpm培养，使OD 600nm参数达到0.7～1.1；当OD600nm值为0.7～1.1的感受态细胞，1μg的质粒用量，6min的冰浴时间，10％甘油、1.8KV、5ms、连续电击3次，恢复时间为3h组合的转化效率最高，达到了331cfu/μg。本发明的停滞棒杆菌的高效转化方法操作简单，转化率高。

公开(公告)号：CN118360284A

公开(公告)日：2024-07-19

申请号：CN202410470969.9

申请日：2024-04-18

申请人： 广东肇庆星湖生物科技股份有限公司

发明人： 蔡友华 ,  欧阳智林 ,  郑穗平 ,  吴子豪 ,  岳影 ,  谢莹玉 ,  谢学敏

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12N9/00 ,  C12N9/26 ,  C12P19/30 ,  C12R1/15

摘要： 本发明提供一种强效组成型启动子及其应用，所述启动子具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。该强效组成型启动子可以强效诱导目的基因表达的，与已知启动子相比，其能够强化5‑氨基咪唑‑4‑甲酰胺核苷酸合成酶的转录水平，从而促进5‑氨基咪唑‑4‑甲酰胺核苷酸合成酶在停滞棒杆菌的表达，进而可提高核苷酸类产品的代谢通量。此外，该启动子突变体SEQ ID NO:1还能够提高异源基因(如Bacillus subtilis subsp.subtilis str.168来源的α‑淀粉酶amyE基因)在停滞棒杆菌中的表达，因此，有望作为通用启动子，提高其工业应用性。

公开(公告)号：CN118256504A

公开(公告)日：2024-06-28

申请号：CN202410499066.3

申请日：2024-04-24

申请人： 广东肇庆星湖生物科技股份有限公司

发明人： 吴子豪 ,  欧阳智林 ,  郑穗平 ,  蔡友华 ,  谢学敏 ,  岳影 ,  谢莹玉

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/77 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N9/10 ,  C12N9/26 ,  C12N1/21 ,  C12R1/15

摘要： 本发明提供一种新型启动子及其应用，该启动子具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。该新型启动子可以强效诱导目的基因表达的，与已知启动子相比，其能够强化磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶的转录水平，从而促进磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶在停滞棒杆菌的表达，进而可提高核苷酸类产品的代谢通量。此外，该新型启动子突变体SEQ ID NO:1能够提高异源基因(如Bacillus subtilis subsp.subtilis str.168来源的α‑淀粉酶amyE基因)在停滞棒杆菌中的表达，因此，有望作为通用启动子，提高其工业应用性。