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公开(公告)号：CN117843734A
公开(公告)日：2024-04-09
申请号：CN202311649456.6
申请日：2023-12-05
申请人： 广西大学 , 广西农业职业技术大学
IPC分类号： C07K14/08 , C12N15/70 , G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/58 , C12Q1/686 , C12N15/11 , C07K1/22 , C12R1/19
摘要： 本发明提供的牛哺乳动物正呼肠孤病毒三型S4蛋白、试剂盒及应用，编码S4蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ.ID.No.1和SEQ.ID.No.2所示，提供了S4蛋白的制备方法和应用，以牛哺乳动物正呼肠孤病毒S4蛋白作为ELISA包被抗原，选取牛哺乳动物正呼肠孤病毒的结构蛋白S4蛋白扩增，克隆至pET‑32a载体表达获得重组蛋白，还提供了扩增重组蛋白pET‑32a‑S4基因的引物、试剂盒和与S4蛋白建立的间接ELISA检测方法。本发明所得重组蛋白抗原性好和免疫原性强，ELISA检测方法操作简单、特异性强、重复性好、敏感度高，能用于检测并准确判断牛哺乳动物正呼肠孤病毒三型的感染情况，为牛哺乳动物正呼肠孤病毒抗体检测、净化和流行病学调查提供一种新的有效的检测手段。
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公开(公告)号：CN113215192B
公开(公告)日：2023-08-11
申请号：CN202110165215.9
申请日：2021-02-06
申请人： 广西大学
摘要： 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒双荧光标记基因重组毒株的构建方法，将猪繁殖与呼吸综合征病毒传代致弱株GXNN1396‑P96作为亲本毒株，利用基因工程的方法缺失NSP2区域465个核苷酸并在缺失位置插入红色荧光蛋白基因，在此基础上，在ORF1b和ORF2a间插入绿色荧光蛋白基因，获得插入双荧光蛋白基因标记的重组PRRSV病毒。测序表明重组病毒遗传稳定，在细胞内连续传至20代内未发现插入的标记基因的荧光丰富度降低。综上，本发明建立了一套猪繁殖与呼吸综合征活病毒载体系统，可同时插入多种外源基因，较一般的活病毒载体系统更加高效，且遗传稳定，为研制重组猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程疫苗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113215192A
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN202110165215.9
申请日：2021-02-06
申请人： 广西大学
摘要： 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒双荧光标记基因重组毒株的构建方法，将猪繁殖与呼吸综合征病毒传代致弱株GXNN1396‑P96作为亲本毒株，利用基因工程的方法缺失NSP2区域465个核苷酸并在缺失位置插入红色荧光蛋白基因，在此基础上，在ORF1b和ORF2a间插入绿色荧光蛋白基因，获得插入双荧光蛋白基因标记的重组PRRSV病毒。测序表明重组病毒遗传稳定，在细胞内连续传至20代内未发现插入的标记基因的荧光丰富度降低。综上，本发明建立了一套猪繁殖与呼吸综合征活病毒载体系统，可同时插入多种外源基因，较一般的活病毒载体系统更加高效，且遗传稳定，为研制重组猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程疫苗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111996213A
公开(公告)日：2020-11-27
申请号：CN202010081916.X
申请日：2020-02-06
申请人： 广西大学
摘要： 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒双荧光标记基因重组毒株的构建方法，将猪繁殖与呼吸综合征病毒传代致弱株Gxnn1396-P96作为亲本毒株，利用基因工程的方法缺失NSP2区域465个核苷酸并在缺失位置插入红色荧光蛋白基因，在此基础上，在ORF1b和ORF2a间插入绿色荧光蛋白基因，获得插入双荧光蛋白基因标记的重组PRRSV病毒。测序表明重组病毒遗传稳定，在细胞内连续传至20代内未发现插入的标记基因的荧光丰富度降低。综上，本发明建立了一套猪繁殖与呼吸综合征活病毒载体系统，可同时插入多种外源基因，较一般的活病毒载体系统更加高效，且遗传稳定，为研制重组猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程疫苗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113046489B
公开(公告)日：2022-12-06
申请号：CN202110550666.4
申请日：2021-05-17
申请人： 广西大学
摘要： 本发明公开了用于检测猪星状病毒的多重RT‑PCR引物组，包括五对特异性引物，分别是引物PAstV1‑F和PAstV1‑R、引物PAstV2‑F和PAstV2‑R、引物PAstV3‑F和PAstV3‑R、引物PAstV4‑F和PAstV4‑R、引物PAstV5‑F和PAstV5‑R，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.10的碱基序列。据此，发明人还制备了相应的RT‑PCR试剂盒并建立相应的RT‑PCR检测方法。本发明在实际操作中简便，减少了操作次数，极大的避免了交叉污染，节约检测时间和试剂消耗。由于建立的检测方法针对的病毒保守区基因扩增，针对性强，灵敏度高。在临床实验中能够达到简便、经济、便捷和准确的检验要求。
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公开(公告)号：CN110735005A
公开(公告)日：2020-01-31
申请号：CN201911172299.8
申请日：2019-11-26
申请人： 广西大学
摘要： 本发明公开了H1、H3亚型SIV和美洲型、欧洲型PRRSV多重RT-PCR快速检测引物，包括四对PCR引物，它们分别针对四种类型病毒；四对PCR引物为引物1至引物8，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.8的碱基序列。据此，发明人还研制了相应的快速检测方法及其试剂盒，对重组质粒标准品的检出量可低至9.86×100copies/μL。本发明具有特异性高，敏感性好，耗时短且成本低的特点，为猪群混合感染的检测提供了快速简便的工具，为临床快速鉴别检测及实验室流行病学调查奠定坚实的基础，有利于养猪业及时制定疾病防控方案，减少猪群死亡率和经济损失。
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公开(公告)号：CN110273024A
公开(公告)日：2019-09-24
申请号：CN201910378503.5
申请日：2019-05-08
申请人： 广西大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了基于猪流行性腹泻病毒M基因的荧光定量PCR检测引物，包括上游引物qPEDV-MF和下游引物qPEDV-MR，它们分别序列表中SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的碱基序列。据此，发明人还研制方便诊断的试剂盒，并建立了相应的检测方法。试验研究表明，将本发明用于猪流行性腹泻病毒的检测诊断，具有较好的特异性、敏感性和重复性，检测只需在3小时内即可完成，快捷省时，成本低，适用于临床样品中PEDV所有基因型的快速检测。
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公开(公告)号：CN109825649A
公开(公告)日：2019-05-31
申请号：CN201910281185.0
申请日：2019-04-09
申请人： 广西大学
摘要： 本发明公开了猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR鉴别引物组，包括两对特异性引物，分别是引物PEDV-BF和PEDV-BR、引物PEDV-F和PEDV-R，分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。据此，发明人还研制了相应诊断试剂盒。应用本发明可在同一反应管内鉴别PEDV G1、G2型的感染类型，为猪群PEDV的准确检测提供了快速简便的工具，为临床快速鉴别检测PEDV G1、G2型毒株及实验室流行病学调查奠定坚实的基础，有助于养猪业准确判断病因及时制定治疗方案，减少经济损失。试验研究表明，本发明特异性好，灵敏度高，重复性好，耗时短且成本低。
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公开(公告)号：CN118360260A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410307090.2
申请日：2024-03-18
申请人： 广西大学
IPC分类号： C12N7/04 , C12N7/00 , C12N15/50 , A61K39/215 , A61P31/14
摘要： 本发明公开了一株ORF3基因自然截短的猪流行性腹泻病毒弱毒株，其保藏编号为CCTCC NO：V202409。本发明弱毒株的ORF3基因由于核苷酸缺失，导致翻译提前终止，弱毒株保留了ORF3自然截短的基因特点。遗传进化分析表明，本发明的弱毒株归属于G2b型，截短的ORF3基因在体外培养中稳定遗传，且在体外高效复制，属细胞适应毒株。ORF3基因自然截短的弱毒株具有天然的遗传标记，接种细胞后能够产生典型的PEDV细胞病变，且在细胞上增殖稳定，毒价均达106.0PFU/mL以上，可作为预防PEDV的潜在候选疫苗。对母猪进行免疫，免疫母猪体临床表征正常，其所生产的仔猪体重增长稳定，对仔猪具有良好的保护效力，可以为研制猪流行性腹泻病毒疫苗以预防和控制PED的发生和流行提供技术基础和保障。
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公开(公告)号：CN117736334A
公开(公告)日：2024-03-22
申请号：CN202311759048.6
申请日：2023-12-20
申请人： 广西大学
IPC分类号： C07K16/40 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12N15/70 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种猪肠病毒G型PLP蛋白多克隆抗体的制备方法，将自然重组猪肠病毒G型全长PLP基因(PLP)或截短PLP基因(PLP‑1)克隆至原核表达载体pET‑32a获得重组质粒pET‑32a‑PLP或pET‑32a‑PLP‑1；将重组质粒经诱导表达、纯化获得重组蛋白；将重组蛋白免疫兔子，获得得到抗PLP兔源多克隆抗体或抗PLP‑1兔源多克隆抗体。结果表明，本发明制备的多克隆抗体效价均达到了1:128000，并且能够通过IFA试验特异性识别自然重组猪肠病毒G型的PLP蛋白。因此，本发明可用于特异性识别自然重组猪肠病毒G型或其PLP蛋白，为后续自然重组PLP基因猪肠病毒G型的病原鉴定、疾病检测以及病毒生物学功能研究奠定了基础。
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