表达载体元件组合、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途

    公开(公告)号:CN113896787A

    公开(公告)日:2022-01-07

    申请号:CN202111171021.6

    申请日:2012-12-19

    摘要: 本文报道,对于瞬时转染,人延伸因子1α启动子(含有内含子A)的使用提供增强的生产力(在LC‑HC‑SM组织中),与使用SV40polyA信号序列相比,牛生长激素polyA信号序列的使用提供增强的生产力,在包含hCMV启动子的载体中,向bGH PolyA信号序列加入HGT产生提高的生产力,载体组织LC(3`‑5′)‑HC‑SM产生改善的表达。对于稳定库,据报道,用包含hEF1α启动子的载体产生的库在分批分析中显示增强的生产力,用包含hEF1α启动子的载体产生的克隆显示减少的低产克隆数,且用包含hEF1α启动子的载体产生的克隆显示更高的IgG表达稳定性。对于单克隆,据报道,选择标记放置在下游的载体组织(LC‑HC‑SM)对单克隆的生产力具有积极作用,且用包含bGH polyA信号序列和hGT的载体产生的克隆具有更高的生产力。

    来自多个核酸的蛋白质表达

    公开(公告)号:CN101815786A

    公开(公告)日:2010-08-25

    申请号:CN200880110216.6

    申请日:2008-10-09

    IPC分类号: C12N15/69 C12N15/85 C07K16/00

    摘要: 本发明报道了用于在CHO细胞中重组产生分泌异源免疫球蛋白的方法,其包括以下步骤:i)提供CHO细胞,其适合在悬浮培养中生长,适合在无血清培养基中生长,无支原体,并且无病毒,ii)提供载体,其包含原核复制起点,赋予针对原核选择剂抗性的第一个核酸序列,编码所述异源免疫球蛋白重链的第二个核酸,和编码所述异源免疫球蛋白轻链的第三个核酸序列,赋予对真核选择剂抗性的第四个核酸,iii)转染所述CHO细胞,其中所述转染包括a)用包含赋予对第一种真核选择剂抗性的第四个核酸的所述载体转染所述CHO细胞,b)通过在含有所述第一种真核选择剂的培养基中的生长来选择CHO细胞,c)用包含赋予对不同于所述第一种真核选择剂的第二种真核选择剂抗性的第四个核酸的所述载体转染所述选择的CHO细胞,d)在含有所述第一种和所述第二种真核选择剂的培养基中选择生长来选择CHO细胞,iv)在适合于表达所述第二个和第三个核酸的条件下,在存在所述第一种和所述第二种真核选择剂的培养基中培养所述转染的CHO细胞,和v)从所述培养基中回收所述分泌的异源免疫球蛋白。