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公开(公告)号：CN119391628A
公开(公告)日：2025-02-07
申请号：CN202411354572.X
申请日：2024-09-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/075 , C12N5/076 , C12Q1/6888 , C12Q1/6879 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种体细胞性别反转模型建立的方法，S1、分离雌雄性腺体细胞，并进行性别鉴定及培养；S2、确定标记基因：筛选E18.5 d雌雄中高表达差异基因，设计RT‑PCR引物，在分离的性腺体细胞中进行检测；S3、构建反转模型：以性激素为诱导剂，确定有效的反转模型性激素诱导浓度，并利用标记基因定量和流式检测确定构建反转模型。本发明不仅在理论研究上具有重要意义，还具备广阔的应用前景和社会经济效益，对推动相关领域的科技进步和产业发展具有积极的促进作用。
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公开(公告)号：CN111965094B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202010853561.1
申请日：2020-08-24
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种比较体外诱导的PGC‑like细胞迁移效率的方法，属于生物技术领域。前期通过不同的诱导体系将ESCs或iPS细胞诱导分化形成PGC‑like细胞，将获得的PGC‑like细胞进行PKH26细胞膜表面标记，然后注射至孵化2.5天的受体鸡胚血管，封口后继续孵化至4.5天，分离鸡胚生殖嵴，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察红色荧光，并通过流式细胞术分析PKH26红色荧光的比例，从而比较不同体系诱导形成的PGC‑like细胞的迁移能力。结果发现能够明确对比出体外不同体系诱导的PGC‑like细胞的迁移能力的差异。本发明切实可靠，严谨准确，成效显著，为研究分析体外诱导的PGCs迁移归巢至生殖嵴的能力提供了一种新颖可行且高效的实验方法。
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公开(公告)号：CN115785261A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211263277.4
申请日：2022-10-14
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K16/06 , C07K16/18 , C12N15/70 , C12N15/113 , G16B30/00
Abstract: 本发明涉及一种高效制备lncRNA编码小肽的多克隆抗体的方法，包括以下步骤：（1）对小肽EPC5进行了生物学分析；（2）化学合成EPC5的核苷酸序列并设计引物，PCR扩增后连入载体构建EPC5原核融合表达载体；（3）测序鉴定构建成功的重组质粒转化BL菌种IPTG诱导表达重组蛋白并纯化，SDS‑PAGE检测抗原纯度；（4）以纯化的重组蛋白与佐剂混合后免疫日本大耳兔并在免疫后获取抗血清并通过ELISA检测抗血清效价；（5）纯化抗体，SDS‑PAGE测定抗体纯化浓度，ELISA联合Western Blot探究成品抗体效价，稀释比例和特异性。通过本发明，能够高效制备lncRNA编码小肽的多克隆抗体；为家禽种质资源保护等工作提供新思路。
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公开(公告)号：CN113061651A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110376568.3
申请日：2021-04-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/6869 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明涉及一种LPS感染后检测并调控鸡RIPK2基因甲基化的方法，包括以下步骤：步骤1）、LPS感染鸡巨噬细胞HD11，检测RIPK2基因表达量变化；步骤2）、重亚硫酸氢盐处理LPS感染前后的基因组；步骤3）、鸡RIPK2基因启动子区CpG岛片段PCR扩增和测序分析；步骤4）、5‑氮杂胞苷和M.SssI分别处理转染鸡RIPK2启动子质粒的鸡HD11细胞；步骤5）、5‑氮杂胞苷和M.SssI分别处理鸡HD11细胞，检测RIPK2基因表达量；通过本发明，对缓解应激性病理损伤和提高家禽健康具有重要的实践意义。
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公开(公告)号：CN111850082A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010748580.8
申请日：2020-07-30
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，属于生物技术领域。在生殖细胞中添加雷帕霉素激活细胞自噬，转染不同MOI值的GFP-LC3慢病毒载体，在显微镜下观察细胞生长状态，排除MOI值过高导致细胞凋亡的分组。收集各组样品，EdU检测各组细胞的增殖效率，同时通过western-blot检测游离的GFP蛋白和自噬标志蛋白LC3-Ⅰ（16 ku）与LC3-Ⅱ（14 ku）之间的转化和比例及荧光显微镜定位LC3蛋白在细胞中的表达情况综合评判该MOI值在鸡生殖细胞中的适用性。本发明操作简单，切实可行，探讨GFP-LC3慢病毒载体在鸡生殖细胞中的转染条件是将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111849918A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010723146.4
申请日：2020-07-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , C12Q1/6888 , C12Q1/6869
Abstract: 一种鸡SSCs中受组蛋白甲基化调控的靶基因的方法，属于生物技术领域。该方法尝试将生物信息学和实验验证相结合，RNA-seq和CHIP-seq相结合，筛选出在鸡SSCs中受组蛋白甲基化调控的关键靶基因。采用本发明对组蛋白甲基化调控的靶基因进行的研究简单可靠，同时考虑到靶基因的保守性，为拓宽组蛋白甲基化在SSCs上的研究提供理论依据。
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公开(公告)号：CN111534481A
公开(公告)日：2020-08-14
申请号：CN202010416986.6
申请日：2020-05-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/074
Abstract: 一种提高鸡胚成纤维细胞体外诱导重编程为鸡iPS细胞效率的方法，属于生物技术领域。前期研究发现通过OSNL体系可将鸡CEF诱导重编程为iPS，但效率较低，在此基础上，研究体细胞诱导重编程过程中糖酵解代谢发挥的作用并对诱导体系进行进一步的优化。本发明操作简单，切实可行，应用广泛。由于鸡诱导多能干细胞具有发育的全能性，在适当条件下可被诱导分化为多种细胞组织，因此可作为一种新的干细胞来源，也为珍稀动物的保种、转基因动物的生产等研究开辟了新思路。本发明将小分子化合物和细胞代谢联系在一起，将为禽类体细胞诱导重编程研究提供了更多的理论基础和技术支撑，也有利于为家禽细胞和胚胎工程研究提供更多的实验材料。
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公开(公告)号：CN110272919A
公开(公告)日：2019-09-24
申请号：CN201910593462.1
申请日：2019-07-03
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/867 , C12N15/66 , C12N5/10 , C12Q1/686
Abstract: 本发明提供一种寻找胚胎干细胞向原始生殖细胞分化过程中Wnt信号通路的靶基因的方法，涉及生物技术领域，本发明所述方法首先对Wnt信号通路的关键转录因子TCF7L2进行靶基因预测，对预测靶基因进行GO功能注释，筛选出其中共同参与生殖细胞发育及干细胞分化的保守性靶基因作为待选靶基因；通过体内外试验验证Wnt信号对待选靶基因转录水平的调控作用，检测待选靶基因的启动子中所述转录因子结合位点缺失时、Wnt信号对待选靶基因转录水平是否有调节作用，通过ChIP-qPCR验证β-Catenin/转录因子复合物与待选靶基因的结合作用，从而确定待选靶基因是否对Wnt信号具有靶向响应作用。本发明所述方法简单易行。
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公开(公告)号：CN104745527B
公开(公告)日：2018-01-05
申请号：CN201510193606.6
申请日：2015-04-22
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了一种新的快速鸡胚盘的分离方法：首先将鸡胚钝端向上握在手中，用镊子尖头轻轻在受精蛋中部钻出一个小孔后，将镊子一端插入小孔，沿着赤道线方向，依次用镊子夹碎蛋壳，延赤道线分离蛋壳一圈后，轻轻的剥离钝端蛋壳，在此过程中应尽量保持鸡胚水平，防止卵黄随蛋清流出；剥离蛋壳后，用镊子将蛋清从卵黄中分离；使用镊子的侧面拨动卵黄，寻找胚盘；找到胚盘后，尽量将胚盘拨到正中央，用剪刀沿胚盘四周呈正方形剪开，此时，使用镊子夹住将含有胚盘的正方形卵黄膜一角，沿水平方向轻轻拉出来，将此卵黄膜放入37℃的PBS的培养皿中，轻轻晃动培养皿,使卵黄和卵黄膜从胚盘上脱离下来，从而获得了完整的胚盘。
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公开(公告)号：CN113355359A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110654978.X
申请日：2021-06-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/867 , C12N15/12 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种高效生产类克隆鸡的方法，包括以下步骤：（1）、构建OCT4,SOX2,NANOG,LIN28四因子的慢病毒过表达载体并转染黑羽狼山鸡成纤维细胞CEF；（2）、利用诱导培养基将转染OSNL的狼山鸡成纤维细胞CEF诱导为iPSCs，对诱导形成的iPSCs进行传代并进行鉴定；（3）、利用诱导培养基将诱导形成的iPSCs进行诱导分化为PGC‑like，并进行鉴定；（4）、收集PGC‑like细胞并将其通过鸡胚血管注射的方法注射至孵化2.5天的隐性白羽鸡胚血管中，并通过冰冻切片方法确定PGC‑like能够在受体隐性白羽鸡中的迁移归巢；（5）、将注射黑羽狼山鸡PGC‑like细胞的隐性白羽受体鸡胚继续孵化至至出壳。通过微卫星技术证明黑羽后代来源于供体的PGC‑like细胞。通过本发明，可大量生产与供体遗传特征相同的类克隆鸡。
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