公开(公告)号：CN118165980A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410295904.5

申请日：2024-03-15

申请人： 杭州师范大学 ,  山东省中医药研究院

发明人： 张屹峰 ,  田庆常 ,  王淑玲 ,  程慧娟 ,  李红秀 ,  徐新刚 ,  徐男

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12P19/34 ,  C12Q1/6806

摘要： 本发明提供了一种通过特异性切刻酶Nt.BstNBI酶切PCR产物制备单链DNA的方法，属于分子生物学技术领域。本发明根据Nt.BstNBI特异性切刻酶的酶切位点设计多段重复的DNA序列，DNA序列的两端包含正反向引物的结合序列用于PCR扩增，其中一条引物的5’端进行生物素标记，用于后续的实验。Nt.BstNBI特异性切刻酶识别PCR产物上的切刻位点，将重复序列切刻成2个短片段，短片段的解链温度均低于反应温度，可以从主链中脱落下来，以此PCR产物生成生物素标记的ssDNA。本发明提供的单链DNA制备方法可在常规实验室以简单、有效、便捷的方式获得单链DNA，避免序列多样性，大大提高了纯度和效率。