公开(公告)号：CN109880827A

公开(公告)日：2019-06-14

申请号：CN201910233705.0

申请日：2019-03-26

申请人： 杭州师范大学附属医院(杭州市第二人民医院)

发明人： 芈肖肖 ,  严健 ,  施军平

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

摘要： 本发明公开了肝豆状核变性斑马鱼模型的建立方法，包括下列步骤：将gRNA靶点序列设计在斑马鱼ATP7B基因外显子2编码的氨基酸结构域上，合成引物；以pMD19-gata5_gRNA scaffold载体为模板，使用引物制备gRNA体外转录模板进行体外转录、纯化回收获得gRNA；将gRNA和Cas9 mRNA注射入单细胞期斑马鱼胚胎，培养筛选从而获得ATP7B突变斑马鱼，本发明用于模拟肝豆状核变性疾病特征。

公开(公告)号：CN109880827B

公开(公告)日：2021-05-18

申请号：CN201910233705.0

申请日：2019-03-26

申请人： 杭州师范大学附属医院(杭州市第二人民医院)

发明人： 芈肖肖 ,  严健 ,  施军平

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

摘要： 本发明公开了肝豆状核变性斑马鱼模型的建立方法，包括下列步骤：将gRNA靶点序列设计在斑马鱼ATP7B基因外显子2编码的氨基酸结构域上，合成引物；以pMD19‑gata5_gRNA scaffold载体为模板，使用引物制备gRNA体外转录模板进行体外转录、纯化回收获得gRNA；将gRNA和Cas9 mRNA注射入单细胞期斑马鱼胚胎，培养筛选从而获得ATP7B突变斑马鱼，本发明用于模拟肝豆状核变性疾病特征。

公开(公告)号：CN116411085A

公开(公告)日：2023-07-11

申请号：CN202211657794.X

申请日：2022-12-22

申请人： 杭州师范大学附属医院(杭州市第二人民医院)

发明人： 芈肖肖 ,  施军平

IPC分类号： C12Q1/6888 ,  G01N33/569 ,  G01N21/64 ,  G01N15/14 ,  G16B20/30

摘要： 本发明公开了一种检测肝豆状核变性中N2型中性粒细胞的方法：通过活体成像、中性粒细胞运动轨迹追踪、中性粒细胞分选、转录组测序、荧光定量PCR、免疫荧光染色、蛋白电泳、细胞核形态分析与样品中性粒细胞分离及流式分析；从中性粒细胞转录组特征、运动轨迹、细胞核形态、表面抗原四个方面的特征，阐明了在肝豆状核变性肝脏病变中后期存在N2型中性粒细胞。证实了N2型中性粒细胞促使了肝豆状核变性肝脏肿瘤的发生，将为后续研究阻止肝豆状核变性肿瘤的发生，提供了潜在的靶点。