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公开(公告)号：CN101565760A
公开(公告)日：2009-10-28
申请号：CN200910062399.5
申请日：2009-06-02
申请人： 武汉三利生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种检测牛副流行性感冒3型病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)RNA抽提液、b)逆转录酶反应液、c)逆转录酶、d)RNA酶抑制剂、e)引物和TaqMan探针、f)标准阳性DNA模板、g)荧光定量PCR反应液，其特征是引物序列分别为正义引物和反义引物：扩增子大小为129bp，荧光探针序列，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入牛副流行性感冒3型病毒保守的F蛋白编码区188bp片段的pGEM－T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释，结果更加准确、可靠、稳定、且重复性好。也可以进行牛流行性感冒的流行病学调查，还可以为相关基础研究提供技术支持，应用前景十分广泛。
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公开(公告)号：CN101565759A
公开(公告)日：2009-10-28
申请号：CN200910062398.0
申请日：2009-06-02
申请人： 武汉三利生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种检测牛细小病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)DNA提取试剂，b)热启动Taq DNA聚合酶，c)引物和TaqMan探针，d)标准阳性DNA模板，e)PCR荧光定量反应液，其特征是：引物序列为正义引物：5′－CCAGTACCAGGAAACGGAGAC－3′，反义引物：5′－GCATGTATTCCGGTCTCCAA－3′，扩增子大小为118bp，荧光探针序列为：5′－FAM－CCTCAACATCTACGTCACCGGACAA－TAMRA－3′，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，靠近3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入细小病毒VP3蛋白编码区118bp片段的pGEM－T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒制备，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。荧光定量PCR试剂盒在奶牛感染细小病毒流行病学调查中的应用，高效方便地对血清制品中的牛细小病毒污染进行实时监控，广泛适用于该病毒感染的流行病学调查。
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公开(公告)号：CN101560572B
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN200910062094.4
申请日：2009-05-15
申请人： 武汉三利生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种检测牛腹泻病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)RNA抽提液、b)逆转录酶反应液、c)逆转录酶、d)RNA酶抑制剂、e)引物和TaqMan探针、f)标准阳性DNA模板、g)荧光定量PCR反应液，其特征在于：正义引物、反义引物、荧光探针序列，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入牛腹泻病毒5’-UTR区185bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。试剂盒的制备步骤：A.标本及标准品处理；B.两步法RT-PCR扩增及实时荧光检测；荧光定量PCR试剂盒在定量检测抗牛腹泻病毒药物中的应用。使定量结果更加准确、可靠、稳定、且重复性好。
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公开(公告)号：CN101565759B
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN200910062398.0
申请日：2009-06-02
申请人： 武汉三利生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种检测牛细小病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)DNA提取试剂，b)热启动Taq DNA聚合酶，c)引物和TaqMan探针，d)标准阳性DNA模板，e)PCR荧光定量反应液，其特征是：引物序列为正义引物：5′-CCAGTACCAGGAAACGGAGAC-3′，反义引物：5′-GCATGTATTCCGGTCTCCAA-3′，扩增子大小为118bp，荧光探针序列为：5′-FAM-CCTCAACATCTACGTCACCGGACAA-TAMRA-3′，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，靠近3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入细小病毒VP3蛋白编码区118bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒制备，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。荧光定量PCR试剂盒在奶牛感染细小病毒流行病学调查中的应用，高效方便地对血清制品中的牛细小病毒污染进行实时监控，广泛适用于该病毒感染的流行病学调查。
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公开(公告)号：CN101565760B
公开(公告)日：2011-11-30
申请号：CN200910062399.5
申请日：2009-06-02
申请人： 武汉三利生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种检测牛副流行性感冒3型病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)RNA抽提液、b)逆转录酶反应液、c)逆转录酶、d)RNA酶抑制剂、e)引物和TaqMan探针、f)标准阳性DNA模板、g)荧光定量PCR反应液，其特征是引物序列分别为正义引物和反义引物：扩增子大小为129bp，荧光探针序列，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入牛副流行性感冒3型病毒保守的F蛋白编码区188bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释，结果更加准确、可靠、稳定、且重复性好。也可以进行牛流行性感冒的流行病学调查，还可以为相关基础研究提供技术支持，应用前景十分广泛。
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公开(公告)号：CN101560572A
公开(公告)日：2009-10-21
申请号：CN200910062094.4
申请日：2009-05-15
申请人： 武汉三利生物技术有限公司
摘要： 本发明公开了一种检测牛腹泻病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)RNA抽提液、b)逆转录酶反应液、c)逆转录酶、d)RNA酶抑制剂、e)引物和TaqMan探针、f)标准阳性DNA模板、g)荧光定量PCR反应液，其特征在于：正义引物、反义引物、荧光探针序列，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入牛腹泻病毒5’－UTR区185bp片段的pGEM－T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。试剂盒的制备步骤：A.标本及标准品处理；B.两步法RT－PCR扩增及实时荧光检测；荧光定量PCR试剂盒在定量检测抗牛腹泻病毒药物中的应用。使定量结果更加准确、可靠、稳定、且重复性好。
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