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公开(公告)号：CN107475140A
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201710825655.6
申请日：2017-09-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 一株在酸性条件下发酵速度提高的高产普鲁兰酶的重组巴斯德毕赤酵母突变体，属于微生物、酶工程技术领域。本发明获得了一种密码子优化的普鲁兰酶编码基因，并构建了一株高表达上述基因的重组菌巴斯德毕赤酵母GS115/pPICK-BdP5 W133。通过对上述重组菌的诱变筛选到一株在pH4.0条件下发酵水平提高的突变株WB138。该突变株在pH4.0条件下，在5L发酵罐上发酵时间缩短24h，发酵酶活一般可以达到1100U/mL以上。该菌株在普鲁兰酶发酵生产中有减少发酵过程染菌损失的可能。
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公开(公告)号：CN119082062B
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202411317675.9
申请日：2024-09-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了理性改造7β‑羟基类固醇脱氢酶辅酶依赖性高效合成熊去氧胆酸，属于生物催化工程领域。本发明获得了酶活力提高和对辅因子NADH亲和力提高的Hs7β‑HSDH突变体A22T/Q23E/L45A/N46E，其酶活性提高了65.2倍，催化效率提高了44.9倍，以7K‑LCA为底物，以NADH为辅酶，突变体催化合成UDCA的产率可达到77.6％，与野生型酶相比，产量增加了13.9倍。与Bm7α‑HSDH偶联后，仅需添加0.5mM NADH，催化底物CDCA一锅法合成UDCA，突变体的产率达到90.1％，比野生型酶增加了11.5倍。
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公开(公告)号：CN107475140B
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201710825655.6
申请日：2017-09-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 一株在酸性条件下发酵速度提高的高产普鲁兰酶的重组巴斯德毕赤酵母突变体，属于微生物、酶工程技术领域。本发明获得了一种密码子优化的普鲁兰酶编码基因，并构建了一株高表达上述基因的重组菌巴斯德毕赤酵母GS115/pPICK‑BdP5 W133。通过对上述重组菌的诱变筛选到一株在pH4.0条件下发酵水平提高的突变株WB138。该突变株在pH4.0条件下，在5 L发酵罐上发酵时间缩短24h，发酵酶活一般可以达到1100 U/mL以上。该菌株在普鲁兰酶发酵生产中有减少发酵过程染菌损失的可能。
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公开(公告)号：CN119506235A
公开(公告)日：2025-02-25
申请号：CN202411489745.9
申请日：2024-10-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了定向进化提高7β‑羟基类固醇脱氢酶正向酶活高效合成熊去氧胆酸，属于生物催化工程领域。本发明获得正向反应活性及与底物亲和力提高的7β‑羟基类固醇脱氢酶突变体TEAE/F152L/W101N。相比于TEAE，突变体酶正向酶活力提高2.9倍，反向活性降低3.6倍，对7K‑LCA的催化效率kcat/Km提高4.3倍，相比于野生型，突变体TEAE/F152L/W101N的酶活性增加206.23倍，对7K‑LCA的催化效率提高了58.56倍。本发明为定向进化羟基类固醇脱氢酶提供了一种通用的技术平台，为生物高效合成熊去氧胆酸提供了优良突变酶，为实现熊去氧胆酸的高效低成本制备奠定了扎实的研究基础。
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公开(公告)号：CN119082062A
公开(公告)日：2024-12-06
申请号：CN202411317675.9
申请日：2024-09-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了理性改造7β‑羟基类固醇脱氢酶辅酶依赖性高效合成熊去氧胆酸，属于生物催化工程领域。本发明获得了酶活力提高和对辅因子NADH亲和力提高的Hs7β‑HSDH突变体A22T/Q23E/L45A/N46E，其酶活性提高了65.2倍，催化效率提高了44.9倍，以7K‑LCA为底物，以NADH为辅酶，突变体催化合成UDCA的产率可达到77.6％，与野生型酶相比，产量增加了13.9倍。与Bm7α‑HSDH偶联后，仅需添加0.5mM NADH，催化底物CDCA一锅法合成UDCA，突变体的产率达到90.1％，比野生型酶增加了11.5倍。
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