一种腺病毒末端反向重复序列的克隆方法

    公开(公告)号:CN118460686A

    公开(公告)日:2024-08-09

    申请号:CN202410605244.6

    申请日:2024-05-16

    摘要: 本发明公开了一种腺病毒末端反向重复序列的克隆方法,包括如下步骤:(1)基因组提取:采用经典方法提取腺病毒基因组DNA,并使用Nanodrop测定DNA浓度;(2)酶切消化;(3)去除末端蛋白;(4)复性处理;(5)环化连接;(6)PCR扩增;(7)克隆与测序:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,切胶回收特定大小的DNA片段,并用TE缓冲液洗脱溶解,随后将片段克隆至pCE3‑blunt载体中,转化TOP10大肠杆菌,通过菌落PCR鉴定阳性克隆,并对阳性克隆进行测序。本发明提高了克隆效率,减少了操作步骤,增强了特异性,减少了错误克隆的可能性,扩大了应用范围,能够应对未知或新发的腺病毒。