一种烟草拟茎点霉菌快速检测方法和应用

    公开(公告)号:CN112921116A

    公开(公告)日:2021-06-08

    申请号:CN202110461216.8

    申请日:2021-04-27

    Abstract: 本发明提供一种烟草拟茎点霉菌快速检测方法及其应用,该烟草拟茎点霉菌快速检测方法包括以下步骤:基因组DNA的提取;特异性引物的设计;特异性引物的检测;特异性引物灵敏度检测;本发明的烟草拟茎点霉菌快速检测方法可以快速、特异、灵敏性的检测到烟草拟茎点属真菌的分子信息,仅仅通过对低到10pg的病原菌基因组DNA进行一个PCR反应就可以做到;弥补了以往单纯通过菌种分离培养,进行形态学分析确认所需要的时间过长的不足,又避免了由于症状的不易区分而导致病害防治的延误,同时可以通过痕量的病原菌存在就可以及时准确检测到病原菌,有利于病害防控和预警,同时为拟茎点霉菌的进一步研究提供科学依据。

    普通型玉米锈病病原真菌的检测引物及分子检测方法

    公开(公告)号:CN102146439B

    公开(公告)日:2013-04-03

    申请号:CN201010606639.6

    申请日:2010-12-27

    Abstract: 本发明涉及一种普通型玉米锈病病原真菌的特异引物及分子检测方法。该特异引物包括:上游引物:5’-TTTAGTAGTCTCTATCTCAACAACA-3',下游引物:5’-AAGACTCTTTTGCATGGTTT-3';采用上述引物,经PCR扩增(扩增参数95℃预变性5min;然后94℃变性45sec,55℃退火45sec72℃延伸90sec,共30个循环;72℃延伸10min)、琼脂糖凝胶电泳,通过扩增产物(片段长度约480bp)检测田间玉米的带菌情况。本发明所用引物对玉米条锈菌具有很强的特异性;可用于玉米锈病的检测,其灵敏度可达0.001ng/μL;本发明检测方法实用性好,操作简便快速。

    一种普通小麦基因TaSNX1的克隆方法、应用及应用方法

    公开(公告)号:CN110964729A

    公开(公告)日:2020-04-07

    申请号:CN201911124815.X

    申请日:2019-11-18

    Abstract: 本发明涉及基因克隆技术领域,公开了一种普通小麦基因TaSNX1的克隆方法,提取小麦总RNA,并合成小麦cDNA;以小麦cDNA为模板PCR扩增TaSNX1基因全长cDNA;回收并纯化扩增产物中目的片段并测序鉴定,又公开上述制备方法制备的小麦基因TaSNX1的应用;还公开其应用方法,先构建出重组植物表达载体,载体上连接有小麦基因TaSNX1的全长克隆和GFP标签,然后将所述重组表达载体T-P转化入植物体内,得到转化植株,利用转化植株研究小麦基因TaSNX1的功能。本发明,克隆得到的小麦TaSNX1基因的全长cDNA序列和改造后的带GFP标签的pCambia1301+GFP双元载体,构建TaSNX1过表达重组载体T-P,然后以农杆菌为媒介通过花絮侵染法转化拟南芥,并通过检测获得阳性突变体植株即构建成TaSNX1拟南芥过表达株系。

    一种稳定敲除abhd16a基因的HEK293细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN113088497A

    公开(公告)日:2021-07-09

    申请号:CN202110433097.5

    申请日:2021-04-22

    Abstract: 本发明涉及一种稳定敲除abhd16a基因的HEK293细胞系及其构建方法,设计靶向abhd16a基因在第三个外显子的sgRNA序列,并构建pHMG‑sgRNA‑sgabhd16a敲除表达载体;将含有靶向abhd16a基因的sgRNA表达载体通过脂质体转染至HEK293细胞,通过CTAB法提取细胞基因组扩增含有靶向sgRNA序列上下游片段,测序检测是否有基因编辑;通过嘌呤霉素筛选后,利用有限稀释法获得除abhd16a基因敲除细胞细胞株,通过免疫印迹法检测敲除细胞株中abhd16a基因敲除后蛋白表达水平。本发明通过CRISPR/Cas9构建HEK293‑ABHD16A‑/‑细胞系,为进一步研究ABHD16A功能和作用机制提供有效的工具。

    一种稳定敲低猪abhd16a基因的ST-KDABHD16A细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN113025579A

    公开(公告)日:2021-06-25

    申请号:CN202110433108.X

    申请日:2021-04-22

    Abstract: 本发明涉及一种稳定敲低猪abhd16a基因的ST‑KDABHD16A细胞系及其构建方法,通过在线设计网站设计猪abhd16a基因的shRNA序列,构建至慢病毒载体PLKO.1‑puro,与双质粒系统逆病毒包装质粒pCMV‑Gag‑Pol、pCVM‑VSV‑G慢病毒通过人HEK293T/17细胞组装获得慢病毒;经过纯化和浓缩后的慢病毒感染ST细胞,通过嘌呤霉素筛选获得稳定敲低abhd16a的ST‑KDABHD16A细胞株。并通过实时荧光定量PCR检测细胞株中abhd16a mRNA表达水平,通过免疫印迹法检测敲减细胞株中ABHD16A蛋白水平的表达。本发明以猪易感细胞系ST细胞为模型,利用慢病毒为工具,构建出稳定敲低猪的abhd16a细胞系ST‑KDABHD16A,为研究猪abhd16a在抵御病毒入侵机制及免疫过程中发挥的作用,以及为感染乙型脑炎病毒后引起的繁殖障碍研究提供新的实验材料。

    南方型玉米锈病病原真菌的检测引物及分子检测方法

    公开(公告)号:CN102174647B

    公开(公告)日:2013-05-15

    申请号:CN201010606982.0

    申请日:2010-12-27

    Abstract: 本发明涉及一种南方型玉米锈病病原真菌的特异引物及分子检测方法。该特异引物包括:上游引物:5’-CTCCAAGAACTTCCTCCTC-3',下游引物:5’-TGACATGAAGTAGAAATTCT-3';采用上述引物,经PCR扩增(扩增参数95℃预变性5min;然后94℃变性45sec,55℃退火45sec72℃延伸90sec,共30个循环;72℃延伸10min)、琼脂糖凝胶电泳,通过扩增产物(片段长度约540bp)检测田间玉米的带菌情况。本发明所用引物对玉米条锈菌具有很强的特异性;可用于玉米锈病的检测,其灵敏度可达0.001ng/μL;本发明检测方法实用性好,操作简便快速。

Patent Agency Ranking