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公开(公告)号：CN110567951B
公开(公告)日：2020-06-02
申请号：CN201910886954.X
申请日：2019-09-19
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： C12Q1/70
摘要： 本发明属于分子生物学领域，涉及基于CRISPR‑Cas12a技术的苹果茎沟病毒可视化检测体系及其检测方法。根据ASGV保守序列设计出crRNA，并制作用于比色检测的AuNP‑DNA，探究Cas12a蛋白体外切割反应时间和linker DNA浓度对检测效果的影响，建立最佳ASGV可视化检测体系及检测方法，该方法为恒温反应条件，并通过CRISPR‑Cas12a‑crRNA复合体识别病毒来提高特异性，且linker DNA具有通用性，不需要昂贵的双标记探针，借助低速离心可在40 min内检测多个样本，其检测下限为5.62×102copies/反应，灵敏度比RT‑PCR高100倍。
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公开(公告)号：CN110241266B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201910700918.X
申请日：2019-07-31
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及病毒的快速检测领域，特别是指一种检测苹果茎沟病的RPA引物对、探针及试剂盒和使用方法。所述RPA引物对序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示。所述试剂盒的反应体系包括25μL预混液Buffer A、10μL预混液Buffer B、7.5μL引物及探针预混液Buffer C和2.5μL 10μM醋酸镁。与RT‑PCR、RPA检测方法相比本申请的RPA‑LFD的灵敏度最高为0.3fg·μL‑1，比RT‑PCR高1000倍，比RPA（琼脂糖凝胶电泳）灵敏度高10倍，三种方法检出率一致性较高，结果可靠。
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公开(公告)号：CN110567951A
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201910886954.X
申请日：2019-09-19
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： G01N21/78 , C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q1/6809 , C12Q1/6811
摘要： 本发明属于分子生物学领域，涉及基于CRISPR-Cas12a技术的苹果茎沟病毒可视化检测体系及其检测方法。根据ASGV保守序列设计出crRNA，并制作用于比色检测的AuNP-DNA，探究Cas12a蛋白体外切割反应时间和linker DNA浓度对检测效果的影响，建立最佳ASGV可视化检测体系及检测方法，该方法为恒温反应条件，并通过CRISPR-Cas12a-crRNA复合体识别病毒来提高特异性，且linker DNA具有通用性，不需要昂贵的双标记探针，借助低速离心可在40 min内检测多个样本，其检测下限为5.62×102copies/反应，灵敏度比RT-PCR高100倍。
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公开(公告)号：CN110241266A
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201910700918.X
申请日：2019-07-31
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及病毒的快速检测领域，特别是指一种检测苹果茎沟病的RPA引物对、探针及试剂盒和使用方法。所述RPA引物对序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示。所述试剂盒的反应体系包括25μL预混液Buffer A、10μL预混液Buffer B、7.5μL引物及探针预混液Buffer C和2.5μL 10μM醋酸镁。与RT-PCR、RPA检测方法相比本申请的RPA-LFD的灵敏度最高为0.3fg·μL-1，比RT-PCR高1000倍，比RPA（琼脂糖凝胶电泳）灵敏度高10倍，三种方法检出率一致性较高，结果可靠。
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