公开(公告)号：CN116286972A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310040458.9

申请日：2023-01-12

Applicant: 浙江大学医学院附属妇产科医院

Inventor： 朱依敏 ,  冯书君 ,  唐敏悦 ,  刘双盈 ,  汪维

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/64 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明涉及了一种EIF2B5基因敲除细胞系及其构建方法与应用，涉及基因工程技术领域。本发明利用CRISPR/Cas9相关系统，经过sgRNA的设计、插入片段的合成及酶切处理，构建出用于敲除EIF2B5基因的重组质粒，通过脂质体瞬转的方法，将质粒转到人宫颈癌细胞HeLa中，经过嘌呤霉素稳转筛选以及单克隆的挑选及验证，从而建立了EIF2B5基因稳定敲除的细胞株EIF2B5‑HeLa。本发明提供的方法可以用于EIF2B5基因的定向敲除致使其功能失活，具有简便、高效、快速、低成本等特点，对于EIF2B5基因功能和相关通路的研究具有重要意义。