基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法

    公开(公告)号:CN118620950A

    公开(公告)日:2024-09-10

    申请号:CN202411103031.X

    申请日:2024-08-13

    摘要: 本发明公开了基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,包括:选择gRNA靶位点;克隆含有gRNA的串联片段;连接各gRNA片段;对连接产物进行PCR扩增;纯化产物和目标载体的酶切;转化;农杆菌介导的水稻转基因;转基因植株的筛选与鉴定。选择gRNA靶位点具体包括如下步骤:根据CRISPR‑Cas9技术的靶位点设计原则;在靠近OsLEC1基因5’端的基因序列上设计2个gRNA靶位点。克隆含有gRNA的串联片段具体包括如下步骤:以质粒pGTR为模板。在本发明中,愈伤组织的分化直接影响了转基因的出苗效率,OsLEC1的敲除可以促进水稻愈伤组织的分化,提示它可能作为一个提高水稻乃至禾本科作物转化效率的一个重要靶标基因,可以以它为出发点来构建各种分子工具提高转化效率。

    一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法

    公开(公告)号:CN118515737A

    公开(公告)日:2024-08-20

    申请号:CN202410985272.5

    申请日:2024-07-23

    发明人: 郭芾 冉乐 舒庆尧

    IPC分类号: C07K14/415 C12N15/70

    摘要: 本发明公开了一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,包括:取适量水稻叶片按水稻RNA快速提取试剂盒说明书提取出水稻的RNA,再用逆转录反应试剂合成cDNA;根据已有数据库公布的基因序列,设计OsAFB4基因(LOC_Os02g52230)的特异引物;本发明以水稻日本晴的cDNA为模板,克隆OsAFB4的CDS,构建不同的原核表达载体并实现在大肠杆菌中的表达。结果显示,pET‑32a‑OsAFB4为最佳融合表达载体,其在大肠杆菌高效表达及纯化的最佳诱导条件为:200μM IPTG诱导,23℃下在LB培养基中培养12小时。该体系有助于进一步了解该蛋白的特性,为后续精准定位其结合生长素类除草剂的关键氨基酸位点及研发抗生长素类除草剂作物新品种奠定了实验基础。