公开(公告)号：CN106906237A

公开(公告)日：2017-06-30

申请号：CN201710253825.8

申请日：2017-04-18

申请人： 淮海工学院 ,  江苏愚公生命科技有限公司

发明人： 李京 ,  高嵩 ,  陈祉月 ,  罗志丹 ,  龚雪梅 ,  张惠铭 ,  张羽 ,  潘绮雯

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N9/12

CPC分类号： C12N15/70 ,  C12N9/1276 ,  C12Y207/07049

摘要： 本发明是一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法，包括突变体克隆构建，所构建的突变体质粒序列均经过测序确认，得到17个突变体质粒；然后进行突变体的筛选：将野生型pET28b‑M‑MLV和17个突变体质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞中，培养、诱导突变酶表达；收集菌体获得突变酶粗提液；选择有蛋白表达的突变酶粗提液，在不同温度下进行逆转录活性筛选：将活性筛选结果阳性的突变体在液体培养基中培养、诱导蛋白表达；收集菌体纯化得到M‑MLV逆转录酶。本发明方法采用分子理性设计与功能筛选相结合，在较小范围内筛选即获得高热稳定性M‑MLV逆转录酶，其热稳定性达到耐热能力65°C。