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公开(公告)号：CN109852633A
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201910212588.X
申请日：2019-03-20
申请人： 淮海工学院 , 江苏愚公生命科技有限公司
摘要： 本发明公开一种基于芽孢杆菌表达系统高效表达灵杆菌非特异性核酸酶的方法，其特征在于：包括以芽孢杆菌作为宿主表达体系，利用芽孢杆菌胞外分泌能力实现灵杆菌非特异性核酸酶的高效表达；本发明重组表达出的灵杆菌非特异性核酸酶，比活力是目前商业化产品的3倍，本发明选用的芽孢杆菌分泌表达系统，从根本上解决了由其他表达系统自身特性所引入的内毒素及糖基化修饰等影响酶活或限制其应用的缺陷，高效的分泌型表达无需破碎细胞，纯化步骤更为简便，可以线性放大，便于规模性生产，值得推广。
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公开(公告)号：CN106755002A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611053913.5
申请日：2016-11-25
申请人： 江苏愚公生命科技有限公司 , 连云港脂立方生物医药研究所有限公司
CPC分类号： C12N9/22 , C12N15/70 , C12N2800/101
摘要： 本发明是一种利用甲基化酶的保护高效重组表达限制性内切酶的方法，其特征在于：所述的甲基化酶是M.CviPI；所述的限制性内切酶C选自：AatI，AscI，BanII，BglI，BmtI，BspQI，BsrDI，BssHII，BtsI，EagI，HindIII，KasI，MluI，NheI，NotI，NruI，NsiI，PstI，PvuII，SacI，SapI，SbfI，SfiI，SphI。本发明方法重组工程菌的构建过程中直接使用广谱保护型甲基化酶M.CviPI，无需针对单个限制性内切酶进行繁琐的甲基化酶基因筛选，应用范围广泛，大大简化了重组表达过程。
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公开(公告)号：CN113186340A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110229652.2
申请日：2021-03-02
申请人： 江苏海洋大学 , 江苏愚公生命科技有限公司
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6858 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一组快速检测碎片化新冠病毒S基因点突变的引物及应用，包括引物组：一组LDR引物LDR‑1、LDR‑2和一组PCR引物LDR‑UF、LDR‑UR，各条引物均为单链DNA分子；本发明将连接酶检测反应与聚合酶链式反应联用，可以检测长度低至40nt、高度降解的碎片化RNA中所含有的点突变，而现有逆转录‑荧光定量PCR技术只能检测长度在100nt以上的RNA模板。
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公开(公告)号：CN111909916B
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202010657454.1
申请日：2020-07-09
申请人： 江苏海洋大学 , 江苏愚公生命科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种来源于南极磷虾的双链特异性核酸酶及其制备方法。将来源于南极磷虾的DSN基因编码序列进行密码子优化，克隆到毕赤酵母表达载体中，构建重组表达载体。用电转化方法将质粒转入毕赤酵母感受态细胞中，获得能高效分泌表达DSN的菌株，在甲醇诱导下，实现DSN的分泌表达。收集发酵液上清，运用镍基质亲和层析方法进行纯化，获得高纯度的DSN蛋白。活性测试结果表明，重组表达获得的南极磷虾DSN具有高效切割DNA双链的能力，对单链DNA和RNA无效，可用于去除RNA样品中DNA的污染。
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公开(公告)号：CN112176040A
公开(公告)日：2021-01-05
申请号：CN202011002396.5
申请日：2020-09-22
申请人： 江苏省海洋资源开发研究院(连云港) , 江苏愚公生命科技有限公司
摘要： 本发明公开一种快速测定DNA聚合酶活性的方法，包括：(1)绘制标准曲线并计算线性回归方程：将两种寡核苷酸探针H1和H2以不同比例混合，测量荧光值并绘制标准曲线，计算线性回归方程；(2)恒温条件下进行DNA聚合酶活性检测反应：以步骤(1)中仅含H1的工作溶液为底物，加入dNTP混合液和镁离子，使用该DNA聚合酶对应的反应缓冲液，配制DNA聚合酶活性检测反应体系；(3)中止反应后测定产物荧光值：恒温反应后强行中止反应，降温到室温后测定产物含量，记录30min下的荧光增加值；(4)计算酶活性：将荧光增加值代入步骤(1)中得到的标准曲线对应的线性回归方程，得出体系中产物的含量，计算原酶液活性。不依赖同位素，操作简单，准确度和重复性好。
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公开(公告)号：CN107557372A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710764317.6
申请日：2017-08-30
申请人： 江苏愚公生命科技有限公司
摘要： 本发明是一种用于表达限制性内切酶SacI的甲基化保护菌株的筛选方法，它通过甲基转移酶M.AluI的重组表达菌株的建立、限制酶SacI的重组表达等步骤，将测序正确的重组表达质粒pBAD-R.SacI转化感受态细胞进行筛选培养，获得限制酶SacI的重组表达菌株；该菌株经扩大培养后，以阿拉伯糖诱导，获得限制酶SacI的重组蛋白。本发明方法实现了限制酶SacI的高效重组表达；利用阿拉伯糖操纵子表达系统对本底表达的严苛控制进行限制酶SacI的重组表达；抵抗限制酶SacI对宿主基因组DNA的酶切，方法稳定且高效；筛选出的M.AluI甲基化保护菌株同样可应用于其他具有类似识别位点的限制酶的重组表达。
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公开(公告)号：CN112143723A
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN202010994643.8
申请日：2020-09-21
申请人： 江苏海洋大学 , 江苏愚公生命科技有限公司
摘要： 本发明公开一种热启动Tth DNA聚合酶及其制备方法，所述的热启动Tth DNA聚合酶指Tth DNA聚合酶与Tth单克隆抗体经过抗原抗体反应而结合形成的抗原抗体复合物，从而达到封闭Tth DNA聚合酶活性的目的。包括以下步骤：获得Tth DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶单克隆抗体；将上述组分按照一定比例混合：所述Tth DNA聚合酶与Tth DNA聚合酶单克隆抗体的摩尔比为1:3‑1:10。所述的Tth DNA聚合酶单克隆抗体的来源包括但不限于通过Tth DNA聚合酶免疫可产生单克隆抗体的动物得到。本发明还涉及由以上方法制备的热启动Tth DNA聚合酶的应用。本发明制备的热启动Tth DNA聚合酶能够很大程度上解决引物错配或二聚体，降低非特异产物的生成，大大提高了特异性和扩增效率，适用于各类PCR扩增。
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公开(公告)号：CN111909916A
公开(公告)日：2020-11-10
申请号：CN202010657454.1
申请日：2020-07-09
申请人： 江苏海洋大学 , 江苏愚公生命科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种来源于南极磷虾的双链特异性核酸酶及其制备方法。将来源于南极磷虾的DSN基因编码序列进行密码子优化，克隆到毕赤酵母表达载体中，构建重组表达载体。用电转化方法将质粒转入毕赤酵母感受态细胞中，获得能高效分泌表达DSN的菌株，在甲醇诱导下，实现DSN的分泌表达。收集发酵液上清，运用镍基质亲和层析方法进行纯化，获得高纯度的DSN蛋白。活性测试结果表明，重组表达获得的南极磷虾DSN具有高效切割DNA双链的能力，对单链DNA和RNA无效，可用于去除RNA样品中DNA的污染。
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公开(公告)号：CN107760697A
公开(公告)日：2018-03-06
申请号：CN201710765015.0
申请日：2017-08-30
申请人： 江苏愚公生命科技有限公司
CPC分类号： C12N9/1007 , C12N9/22 , C12N15/66 , C12N15/74
摘要： 一种用于表达限制性内切酶FspI的甲基化保护菌株的筛选方法，通过甲基转移酶M.HhaI基因的获取，构建甲基转移酶M.HhaI的重组表达菌株，甲基化保护菌株的筛选，限制性内切酶FspI基因的获取，构建限制性内切酶FspI的重组表达菌株；再限制酶FspI的重组表达，获得限制酶FspI的重组表达菌株。本发明方法实现了限制酶FspI的高效重组表达；利用乳糖操纵子表达系统进行限制酶FspI的重组表达；抵抗限制酶FspI对宿主基因组DNA的酶切，相对无甲基化保护的表达系统，可稳定且高效进行限制酶FspI的重组表达；筛选出的M.HhaI甲基化保护菌株同样可应用于其他具有类似识别位点的限制酶的重组表达。
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公开(公告)号：CN106906237A
公开(公告)日：2017-06-30
申请号：CN201710253825.8
申请日：2017-04-18
申请人： 淮海工学院 , 江苏愚公生命科技有限公司
CPC分类号： C12N15/70 , C12N9/1276 , C12Y207/07049
摘要： 本发明是一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法，包括突变体克隆构建，所构建的突变体质粒序列均经过测序确认，得到17个突变体质粒；然后进行突变体的筛选：将野生型pET28b‑M‑MLV和17个突变体质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞中，培养、诱导突变酶表达；收集菌体获得突变酶粗提液；选择有蛋白表达的突变酶粗提液，在不同温度下进行逆转录活性筛选：将活性筛选结果阳性的突变体在液体培养基中培养、诱导蛋白表达；收集菌体纯化得到M‑MLV逆转录酶。本发明方法采用分子理性设计与功能筛选相结合，在较小范围内筛选即获得高热稳定性M‑MLV逆转录酶，其热稳定性达到耐热能力65°C。
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