公开(公告)号：CN118932020A

公开(公告)日：2024-11-12

申请号：CN202411117606.3

申请日：2024-08-15

Applicant: 湖南大学

Inventor： 柯国梁 ,  陈婷 ,  陈美 ,  张晓兵

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/682 ,  C12Q1/6886 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基于尺寸选择性HCR探针及其制备方法与应用。本发明提供的这种基于尺寸选择性杂交链反应探针qTcage，由一个DNA纳米笼，用于对成熟miRNA的尺寸选择性响应，以及一个四面体DNA结构组成。qTDNH12包含两个预淬灭发夹1(H1)和两个发夹2(H2)，能够高效HCR产生荧光信号输出。在成熟miRNA存在的情况下，Ts链通过链置换从DNA纳米笼中释放出来，启动了四面体上的HCR。本发明的qTcage探针利用DNA纳米笼的尺寸选择效应提高了传统HCR反应的准确性，从而减少了细胞内成熟miRNA成像过程中来自pre‑miRNA的干扰。其次，HCR精确的信号放大，大大提高了检测灵敏度，实现了对细胞内成熟miRNA的灵敏成像。

公开(公告)号：CN118207311A

公开(公告)日：2024-06-18

申请号：CN202410446268.1

申请日：2024-04-15

Applicant: 湖南大学

Inventor： 柯国梁 ,  高营营 ,  龚超男 ,  张晓兵 ,  宦双燕 ,  陈美

IPC: C12Q1/6876 ,  C12Q1/6816 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种DNA纳米笼探针及其制备方法与应用。该纳米笼探针包括具有内部空腔的DNA框架、由双链RF/RQ构成的miRNA响应探针与A‑HP发夹。该纳米笼探针的制备方法包括：将双链RF/RQ与DNA框架进行退火组装，然后再与A‑HP发夹孵育，形成所述DNA纳米笼探针。本发明得益于DNA纳米框架的尺寸选择性，更小的成熟miRNA而不是更大的pre‑miRNA才能进入DNA纳米笼的空腔进行分子识别，从而显著减少了pre‑miRNA的信号干扰。同时，DNA纳米笼探针无需转染即可进入细胞中并在内源性酶APE1的驱动下对细胞内miRNA成像进行精准检测。

公开(公告)号：CN114410790B

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202210100232.9

申请日：2022-01-27

Applicant: 湖南大学

Inventor： 陈美 ,  柯国梁 ,  周敏 ,  殷垚 ,  张晓兵

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了一种用于检测ctDNA的生物传感检测系统及其检测方法，包括有：球形核酸报告子、RCA产物和CRISPR/Cas12a体系；其中：球形核酸报告子为巯基DNA链修饰的金纳米粒子；RCA产物为待检测物ctDNA与5’磷酸化线性挂锁探针进行RCA扩增反应获得的产物；CRISPR/Cas12a体系中包含有LbCas12a蛋白和crRNA形成的稳定二元复合物。本发明SNA在生理环境中具有优异的抵抗核酸酶切割的能力。因此，用SNA报告子代替ssDNA报告子可以提高CRISPR/Cas12a体系的稳定性；并利用滚环扩增(RCA)具有操作简单、反应温度温和、扩增效率高等优点，将RCA与CRISPR/Cas12a体系结合在一起，在可以显著提高体系的灵敏度。

公开(公告)号：CN114410790A

公开(公告)日：2022-04-29

申请号：CN202210100232.9

申请日：2022-01-27

Applicant: 湖南大学

Inventor： 陈美 ,  柯国梁 ,  周敏 ,  殷垚 ,  张晓兵

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了一种用于检测ctDNA的生物传感检测系统及其检测方法，包括有：球形核酸报告子、RCA产物和CRISPR/Cas12a体系；其中：球形核酸报告子为巯基DNA链修饰的金纳米粒子；RCA产物为待检测物ctDNA与5’磷酸化线性挂锁探针进行RCA扩增反应获得的产物；CRISPR/Cas12a体系中包含有LbCas12a蛋白和crRNA形成的稳定二元复合物。本发明SNA在生理环境中具有优异的抵抗核酸酶切割的能力。因此，用SNA报告子代替ssDNA报告子可以提高CRISPR/Cas12a体系的稳定性；并利用滚环扩增(RCA)具有操作简单、反应温度温和、扩增效率高等优点，将RCA与CRISPR/Cas12a体系结合在一起，在可以显著提高体系的灵敏度。