公开(公告)号：CN106957857A

公开(公告)日：2017-07-18

申请号：CN201610854586.7

申请日：2016-09-23

申请人： 西北农林科技大学

发明人： 王小龙 ,  陈玉林 ,  蔡蓓 ,  牛怡源 ,  马宝华

IPC分类号： C12N15/85 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/85 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/102 ,  C07K14/495 ,  C07K14/50 ,  C12N2800/106 ,  C12N2800/80 ,  C12N2810/10

摘要： 本发明提供了一种利用CRISPR/Cas9系统共同敲除山羊MSTN和FGF5基因的方法。本发明首先获得针对山羊MSTN第二外显子和第三外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列，及针对山羊FGF5第一外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列，分别设计并合成相应的sgRNA寡核苷酸序列；接着分别构建针对MSTN第二外显子和第三外显子、FGF5第一外显子且含T7启动子的体外转录载体；利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA和sgRNA，可用于生产MSTN和FGF5共同敲除的转基因山羊。

公开(公告)号：CN106957858A

公开(公告)日：2017-07-18

申请号：CN201610854587.1

申请日：2016-09-23

申请人： 西北农林科技大学

发明人： 陈玉林 ,  王小龙 ,  蔡蓓 ,  牛怡源 ,  马宝华

IPC分类号： C12N15/85 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/85 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/103 ,  C12N2800/106 ,  C12N2800/80

摘要： 本发明提供了一种利用CRISPR/Cas9系统共同敲除绵羊MSTN、ASIP、BCO2基因的方法。本发明首先获得针对绵羊MSTN第二外显子和第三外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列、针对绵羊ASIP第五外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列、针对绵羊BCO2第二外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列，分别设计并和成相应的sgRNA寡核苷酸序列；接着分别构建针对绵羊MSTN第二外显子和第三外显子、针对绵羊ASIP第五外显子、针对绵羊BCO2第二外显子，且含T7启动子的saRNA体外转录载体；利用Cas9和sgRNA的体外转录载体通过体外转录获得Cas9 mRNA和sgRNA，通过受精卵注射可用于生产MSTN、ASIP、BCO2共同敲除的转基因绵羊。