公开(公告)号：CN107034233A

公开(公告)日：2017-08-11

申请号：CN201710353716.3

申请日：2017-05-18

申请人： 中国科学院重庆绿色智能技术研究院

发明人： 裴得胜 ,  罗娟娟

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/8509 ,  A01K67/0275 ,  A01K2217/07 ,  A01K2227/40 ,  C07K14/461 ,  C12N9/22 ,  C12N15/65 ,  C12N15/907 ,  C12N2800/106 ,  C12N2810/10

摘要： 本发明提供一种内源性启动子驱动外源基因表达的方法，包括如下步骤：步骤A：选择内源性基因，确定内源性基因的打靶位点以及打靶序列，合成gRNA；步骤B：构建外源性基因重组表达载体；步骤C：将Cas 9 capped RNA、步骤A获得的gRNA、步骤B获得的重组表达载体共同注射入动物的受精卵中，使得目的基因整合进入基因组，选育得到内源性启动子驱动外源性基因表达的动物体。本发明不破坏基因原有的功能，运用微同源技术将外源基因进行同源重组，明显提高重组效率；由内源性启动子驱动外源基因的表达，有助于外源基因与内源靶基因等量表达，利用外源基因真实地重现内源靶基因的表达模式，同时有效避免复杂性启动子的扩增。

公开(公告)号：CN105861450A

公开(公告)日：2016-08-17

申请号：CN201610312918.9

申请日：2016-05-12

申请人： 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

发明人： 徐黎明 ,  卢彤岩 ,  赵景壮 ,  刘淼 ,  曹永生

IPC分类号： C12N7/00 ,  C12N15/85 ,  C07K14/08 ,  C12N15/11 ,  A61K48/00 ,  A61K39/205 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

CPC分类号： C12N7/00 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/53 ,  A61K2039/552 ,  C07K14/005 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85 ,  C12N2310/10 ,  C12N2760/20021 ,  C12N2760/20022 ,  C12N2760/20034 ,  C12N2800/106

摘要： 本发明涉及一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用，其制备方法包括以下步骤：(1)设计扩增J基因型传染性造血器官坏死病毒表面糖蛋白(Glycoprotein，G)基因的特异性引物对；(2)利用病毒敏感细胞系培养IHN病毒分离株，然后提取病毒基因组RNA；(3)采用步骤(1)所得引物对步骤(2)所得的病毒基因组RNA进行一步法RT?PCR扩增，将RT?PCR扩增产物经电泳后回收产物；(4)将步骤(3)所得的回收产物与pMD19?T simple载体连接，将连接产物转化DH5α感受态细胞，挑取单菌落扩大培养后提取质粒并进行PCR鉴定，将鉴定正确的质粒进行测序；(5)将步骤(4)鉴定正确的IHNV病毒分离株糖蛋白G基因开放阅读框部分利用BamH I和Xho I酶切位点克隆到真核表达载体pcDNA3.1上，构建核酸疫苗。

公开(公告)号：CN105524941A

公开(公告)日：2016-04-27

申请号：CN201610035065.9

申请日：2016-01-19

申请人： 扬州大学

发明人： 高波 ,  王赛赛 ,  王亚丽 ,  沈丹 ,  薛松磊 ,  宋成义 ,  崔恒宓 ,  王克华 ,  黎寿丰

IPC分类号： C12N15/85

CPC分类号： C12N15/8509 ,  A01K2267/02 ,  C12N2800/106 ,  C12N2800/60 ,  C12N2800/90 ,  C12N2830/008

摘要： 本发明提供了一种特异于禽类原始生殖细胞的基因转移系统和方法。该基因转移系统包括含有具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的vasa启动子的转座酶辅助质粒。该基因转移方法包括：(1)使用生物工程方法，构建含有vasa启动子或者含有vasa启动子和通用增强子元件的转座酶辅助质粒；(2)使用生物工程方法，构建含有需要转移的目的基因表达盒的转座子供体质粒；(3)提取质粒后，将上述转座子供体质粒和转座酶质粒按1:2比例混合均匀，调整其终浓度为500ng—1.5μg/μL；(4)将步骤(3)中所得的混合质粒使用包埋剂包裹后，转染禽类早期胚胎血液中PGCs细胞。通过本发明，可以实现外源基因在禽类胚胎PGCs基因组中高效特异整合，从而达到提高转基因禽的制备效率的目的。

公开(公告)号：CN109055425A

公开(公告)日：2018-12-21

申请号：CN201810781605.7

申请日：2018-07-17

申请人： 南京农业大学

发明人： 赵春青 ,  盛成旺 ,  贾忠强 ,  黄秋堂 ,  韩召军 ,  刘泽文

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/65

CPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N2800/106

摘要： 本发明公开了带有黄色或红色荧光标签的可用于非洲爪蟾卵母细胞表达的载体及应用，通过分子生物学手段对pGH19质粒进行改造，具体开发成含有增强型黄色或单体红色荧光蛋白标签且适合非洲爪蟾卵母细胞表达的载体pGH19‑EYFP或pGH19‑mRFP。本发明所述载体既可正常表达目的基因，又可通过荧光显微镜或共聚焦显微镜检测带有黄色或红色荧光标签的靶蛋白的分布情况和表达模式，为非洲爪蟾卵母细胞表达的蛋白情况提供更直观简洁的检测方式；可实时观察蛋白表达的时空动态；对于目的蛋白后期的提取、纯化、鉴定和功能性分析，仅需使用通用型抗体即可检测到靶标蛋白的表达情况，大大简化了实验流程，节省了实验时间和经济成本。

公开(公告)号：CN107753943A

公开(公告)日：2018-03-06

申请号：CN201710940243.7

申请日：2017-09-30

申请人： 华南农业大学

发明人： 焦培荣 ,  欧阳国文 ,  廖明 ,  王念晨 ,  张友

IPC分类号： A61K39/145 ,  A61P31/16 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N15/44

CPC分类号： A61K39/12 ,  A61K2039/53 ,  C07K14/005 ,  C12N15/66 ,  C12N15/85 ,  C12N2760/16122 ,  C12N2760/16134 ,  C12N2800/106 ,  C12N2800/22

摘要： 本发明公开了一种H7亚型禽流感DNA疫苗及其制备方法。具体由H7亚型禽流感病毒HA基因和真核表达载体连接构建的质粒表达获得所述H7亚型禽流感DNA疫苗。本发明首先获得H7亚型禽流感病毒的HA基因序列，再根据鸡的密码子偏嗜性进行密码子优化，获得优化的optiHA基因序列如SEQ ID NO.4所示；然后以该优化的optiHA基因与真核表达载体连接构建质粒，并表达获得H7亚型禽流感DNA疫苗。所述H7亚型禽流感DNA疫苗能够预防家禽H7亚型禽流感，减少感染，对养殖业与人类健康具有十分重要的意义。

公开(公告)号：CN106729694A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201611182570.2

申请日：2016-12-20

申请人： 天津瑞普生物技术股份有限公司

发明人： 唐荣宏 ,  李亚杰 ,  杨保收 ,  付旭彬 ,  梁武

IPC分类号： A61K39/235 ,  A61P1/16 ,  A61P31/20 ,  C12N15/85

CPC分类号： A61K39/12 ,  A61K2039/53 ,  A61K2039/552 ,  A61K2039/57 ,  A61K2039/575 ,  C12N15/85 ,  C12N2710/10234 ,  C12N2800/106

摘要： 本发明提供了一种Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗及其应用，该技术方案基于实验手段研究发现研究表明纤维突起具有良好的免役原型，据此以4型禽腺病毒纤维蛋白C‑末端基因作为抗原物质，并在其天然序列的基础上进行了密码子优化，克隆入真核表达载体pCAGGS中，构建了DNA疫苗pCAGoptiFAV4C。本发明研究的禽腺病毒DNA疫苗采用了基因工程发酵的方法制备抗原，成本低，抗原纯净，使用安全。利用血清学方法和免疫攻毒法评价该疫苗的免疫效果，结果显示，该疫苗对禽能够提供有效的免疫保护，具有很好的商品化开发前景。与传统疫苗相比，本发明的DNA疫苗既拥有亚单位疫苗和灭活疫苗的安全性，又具有只有弱毒疫苗或重组疫苗才有的同时诱导体液免疫和细胞免疫应答的特点。

公开(公告)号：CN106636201A

公开(公告)日：2017-05-10

申请号：CN201611222716.1

申请日：2016-12-27

申请人： 安徽大学

发明人： 班谦 ,  惠文巧 ,  刘大海 ,  叶守东 ,  何侃

IPC分类号： C12N15/85

CPC分类号： C12N15/85 ,  C07K14/723 ,  C12N2800/106 ,  C12N2810/10

摘要： 本发明公开了一种MC1R基因载体及其构建方法，包括MC1R‑neo和MC1R‑GFP；MC1R‑neo核苷酸序列为SEQ ID NO：1；MC1R‑GFP核苷酸序列为SEQ ID NO：2。本发明采用CRISPR/Cas9系统构建MC1R基因敲除载体，只需针对该基因敲除位点设计一个长约20bp左右的sgRNA，连接通用的Cas9基因即可。因此，与传统的ZFNs、TALENs等基因敲除技术比较而言，采用CRISPR/Cas9构建基因敲除载体更为简单快捷，便于进一步推广和应用于后续实验。

公开(公告)号：CN106591362A

公开(公告)日：2017-04-26

申请号：CN201610016901.9

申请日：2016-01-12

申请人： 中国水产科学研究院长江水产研究所

发明人： 李创举 ,  杨晓鸽 ,  危起伟 ,  岳华梅 ,  叶欢

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N15/89 ,  C12N15/12 ,  C07K14/46

CPC分类号： C12N15/85 ,  C07K14/461 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N15/89 ,  C12N2800/106 ,  C12N2840/007

摘要： 本发明公开了一种GFP‑Addnd 3’UTR重组表达载体，其载体为表达载体pCS2+，其上连接有达氏鲟dnd基因的3’UTR片段和绿色荧光蛋白编码区基因。本发明的GFP‑Addnd3’UTR重组表达载体可以用于标记达氏鲟原始生殖细胞，具体标记方法为：体外合成GFP‑Addnd 3’UTR重组表达载体的mRNA，然后通过显微注射的方式注入达氏鲟胚胎发育1‑cell期的胚胎中，然后进行孵化培养，并实时观察不同发育时期绿色荧光蛋白的表达情况。由于Addnd为母源性的基因，且仅在卵巢和精巢中表达，因此，采用本发明的标记方法后，在受精卵发育过程中可检测到绿色荧光蛋白的表达，从而有利于跟踪原始生殖细胞的迁移发育和进一步深入的科学研究。

公开(公告)号：CN105816871A

公开(公告)日：2016-08-03

申请号：CN201610312917.4

申请日：2016-05-12

申请人： 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

发明人： 徐黎明 ,  赵景壮 ,  卢彤岩 ,  刘淼 ,  曹永生

IPC分类号： A61K39/205 ,  A61K48/00 ,  C12N15/47 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85 ,  A61P31/14

CPC分类号： A61K39/12 ,  A61K2039/53 ,  A61K2039/54 ,  A61K2039/552 ,  C07K14/005 ,  C12N15/85 ,  C12N2760/20022 ,  C12N2760/20034 ,  C12N2800/106

摘要： 本发明提供了一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用，所述中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗的制备方法包括以下步骤：(1)设计扩增J基因型传染性造血器官坏死病毒表面糖蛋白(Glycoprotein，G)基因的特异性引物；(2)利用病毒敏感细胞系培养IHN病毒分离株，然后提取病毒基因组RNA；(3)采用步骤(1)所得引物对步骤(2)所得的病毒基因组RNA进行一步法RT?PCR扩增；(4)将步骤(3)所得的回收产物与pMD19?T simple载体连接，将连接产物转化DH5α感受态细胞，挑取单菌落，扩大培养后提取质粒进行PCR鉴定，将鉴定正确的质粒进行测序；(5)将步骤(4)鉴定正确的IHNV病毒分离株糖蛋白基因利用BamH I和Xho I酶切位点克隆到真核表达载体pcDNA3.1上，构建核酸疫苗。

公开(公告)号：CN109022373A

公开(公告)日：2018-12-18

申请号：CN201810864918.9

申请日：2018-08-01

申请人： 中国兽医药品监察所

发明人： 杨承槐 ,  毛娅卿 ,  刘丹 ,  侯力丹 ,  黄小洁 ,  李俊平 ,  李启红 ,  王乐元

IPC分类号： C12N7/01 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/869 ,  A61K39/245 ,  A61K39/145 ,  A61K39/29 ,  A61K39/23 ,  A61K39/12 ,  A61P31/22 ,  A61P31/16 ,  A61P31/14 ,  A61P31/20 ,  C07K16/08 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  C12R1/93

CPC分类号： C12N7/00 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/5254 ,  A61K2039/5256 ,  A61K2039/552 ,  A61K2039/70 ,  A61P31/14 ,  A61P31/16 ,  A61P31/20 ,  A61P31/22 ,  C07K16/085 ,  C12N15/85 ,  C12N15/86 ,  C12N15/902 ,  C12N2710/16321 ,  C12N2710/16334 ,  C12N2710/16343 ,  C12N2750/14034 ,  C12N2760/16134 ,  C12N2770/24134 ,  C12N2800/106

摘要： 本发明涉及鸭瘟病毒UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失突变株及其构建方法与应用，本发明提供一种UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失的重组鸭瘟病毒毒株，该毒株具有减弱的毒力，对鸭无致病性，且具有良好的免疫原性，能够实现抗鸭瘟病毒的免疫保护。本发明提供的减毒鸭瘟病毒毒株能够用于制备鸭瘟活疫苗，或作为活病毒载体经插入其它病原的抗原基因制备基因工程活载体疫苗，具有很大的应用潜力和市场。