公开(公告)号：CN111394359A

公开(公告)日：2020-07-10

申请号：CN202010208089.6

申请日：2020-03-23

Applicant: 西南大学

Inventor： 丁伟 ,  周红 ,  郭富友 ,  刘瑾林

IPC: C12N15/12 ,  C07K14/435 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及朱砂叶螨钙调蛋白基因的克隆、原核表达和蛋白纯化方法，通过提取朱砂叶螨的总RNA，转录获得其cDNA，采用RT-PCR方法从朱砂叶螨中扩增出特有基因朱砂叶螨钙调蛋白基因，克隆测序后，以获得的朱砂叶螨钙调蛋白基因全长为模板，用CaM上下游引物扩增获得目的片段，分别使用Bam HI和Sma I酶切pGEX-6P-1(+)载体和目的片段，利用同源重组的方法将目的片段连接到载体上，抽提获得TcCaM-pGEX-6P-1(+)质粒，转入BL21感受态细胞中，进行IPTG诱导蛋白表达，采用SDS-PAGE鉴定获得分子量为19kDa的朱砂叶螨钙调蛋白。本发明构建了朱砂叶螨钙调蛋白基因的重组表达载体，通过原核系统表达了钙调蛋白的重组蛋白，为今后朱砂叶螨钙调蛋白基因的体外研究奠定了基础。