一种去氢表雄酮的制备方法及其制备用酶

    公开(公告)号:CN109312382A

    公开(公告)日:2019-02-05

    申请号:CN201880001977.1

    申请日:2018-02-08

    摘要: 本发明提供了一种去氢表雄酮的制备方法,包括:在保护气氛下,向叔丁醇中加入叔丁醇钾,搅拌均匀后加入4-雄烯二酮得到混合料,将所述混合料滴加至含有抗坏血酸钠的乙酸溶液中反应得到5-雄烯二酮;将所述5-雄烯二酮溶于有机溶剂中,并添加酮还原酶、葡萄糖脱氢酶、葡萄糖和氧化还原辅酶得到混合液,控制所述混合液的pH为6.0-6.3,于22-26℃下搅拌反应1-6小时后得到反应液,将所述反应液分离提纯后得到去氢表雄酮,所述酮还原酶和所述葡萄糖脱氢酶由微生物菌株共表达产生并以粗酶液形式添加。该制备方法合成工艺步骤少,操作简单,产率高,成本低,可以广泛适用于工业化规模生产。本发明还提供了一种制备用酶。

    一种烟酰胺单核苷酸的纯化方法

    公开(公告)号:CN108026132A

    公开(公告)日:2018-05-11

    申请号:CN201680003982.7

    申请日:2016-07-30

    IPC分类号: C07H1/06 C07H19/048

    CPC分类号: C07H1/06 C07H19/048

    摘要: 一种烟酰胺单核苷酸的纯化方法,涉及对生物催化法制备得到的NMN的粗产物进行纯化的方法。该方法的目的在于解决现有NMN的纯化方法存在的收率低和纯化产物纯度低的问题,该方法包括以下步骤:A、将生物催化法制备得到的烟酰胺单核苷酸粗产物上阴离子交换树脂柱,用水洗脱,收集洗脱液;B、步骤A的洗脱液进行纳滤浓缩处理,收集浓缩液;C、步骤B的浓缩液上螯合树脂柱,用水洗脱,收集洗脱液;D、步骤C的洗脱液经浓缩、干燥处理后即得纯化后的烟酰胺单核苷酸成品。该方法对于采用生物催化法制备NMN所获得的NMN粗产物的纯化具有普遍适用性。

    一种纯化氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法

    公开(公告)号:CN104876994B

    公开(公告)日:2017-11-03

    申请号:CN201510255149.9

    申请日:2015-05-19

    发明人: 傅荣昭 戴柱 张琦

    IPC分类号: C07H19/207 C07H1/06

    CPC分类号: C07H1/06 C07H19/207 C07H21/02

    摘要: 本发明公开了一种纯化氧化型β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法,包括步骤:将酶催化反应所得反应液用滤膜进行微滤和纳滤,收集浓缩液备用;然后将浓缩后的滤液加入酸调节浓缩液pH,用反相色谱柱为固定相,以缓冲盐溶液为A相、乙醇为B相,进行梯度洗脱纯化;将纯化所得的溶液用滤膜纳滤浓缩,然后用真空冷冻干燥机冻干。本发明使用反相高效液相色谱纯化氧化型β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,使得氧化型β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸纯度高、收益好,达到产业化要求。

    一种通过生物催化生产磷酸肌酸的方法

    公开(公告)号:CN105671096A

    公开(公告)日:2016-06-15

    申请号:CN201610128871.0

    申请日:2016-03-08

    发明人: 傅荣昭 张琦

    IPC分类号: C12P13/00

    CPC分类号: C12N9/12 C12N15/70 C12P13/00

    摘要: 一种通过生物催化生产磷酸肌酸的方法,涉及磷酸肌酸的制备方法的技术领域。本发明提供的方法主要解决磷酸肌酸现有的生物催化生产方法产率低、成本高的技术问题,该方法具体为以肌酸和三磷酸腺苷为底物,在肌酸激酶突变体的催化作用下生产磷酸肌酸,所述肌酸激酶突变体具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列,该氨基酸序列的特点是将肌酸激酶亲本的氨基酸序列中第33位点的Val突变为Ala。该肌酸激酶突变体的比活性较肌酸激酶亲本高出80%,该方法使肌酸转化为磷酸肌酸的转化率超过85%,适于大规模工业化生产。

    一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法

    公开(公告)号:CN104892710A

    公开(公告)日:2015-09-09

    申请号:CN201510255187.4

    申请日:2015-05-19

    发明人: 傅荣昭 戴柱 张琦

    IPC分类号: C07H19/207 C07H1/06

    CPC分类号: C07H19/207 C07H1/06

    摘要: 本发明公开了一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法,包括步骤:对酶催化反应所得反应液先后进行微滤和纳滤,收集浓缩液备用;然后在浓缩液中加入离子对试剂,用反相色谱柱为固定相,以缓冲盐溶液为A相、乙醇为B相,进行梯度洗脱纯化;采用阳离子交换树脂将纯化后滤液中的阳离子转化为钠离子;对上述步骤所得的滤液进行纳滤,最后用真空冷冻干燥机冻干。本发明使用反相高效液相色谱和阳离子交换法纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,使得还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸纯度高、收益好,达到产业化要求。