基于RPA检测鱼类传染性造血器官坏死病毒的方法

    公开(公告)号:CN109487004A

    公开(公告)日:2019-03-19

    申请号:CN201811465659.9

    申请日:2018-12-03

    申请人: 梁君妮

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/6844 C12R1/93

    摘要: 本发明涉及一种基于RPA检测鱼类传染性造血器官坏死病毒的方法,其属于生物检测技术领域。其包括以下步骤:根据病毒G蛋白保守序列确定RPA引物;其中上游引物:5’-GATGAGTGGGAGGGCTTTCACGGATTGC-3’;下游引物:5’-GCACGCGGCAACAGCAAGGAGGAGAACAAGG-3’;在RNA提取试剂盒内提取病毒RNA,通过反转录试剂盒将病毒RNA制备成cDNA,冷藏备用;根据OD260/OD280和浓度值在核酸蛋白分析仪下检测cDNA的纯度和含量;RPA反应体系;RPA产物鉴定。本发明的有益效果是:依据IHNV保守序列G基因设计特异性引物,此检测方法更简便高效、特异性强、灵敏度高,不依赖于高端仪器并适用于现场快速检测,可控制鱼类疫病的爆发。

    用于检测传染性脾肾坏死病毒的特异性引物对、探针、检测试剂盒

    公开(公告)号:CN109055618A

    公开(公告)日:2018-12-21

    申请号:CN201811066842.1

    申请日:2018-09-13

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/6844

    摘要: 本发明公开了一种用于检测传染性脾肾坏死病毒传染性脾肾坏死病毒的特异性引物对。本发明还公开了与所述的引物对配合使用的探针。本发明还公开了一种检测试剂盒。本发明以传染性脾肾坏死病毒中DNA polymerase基因为检测靶点,通过恒温扩增技术,使用特异性的引物和探针组合,提高了传染性脾肾坏死病毒传染性脾肾坏死病毒的检测便捷性和特异性,同时检测时间也大大缩短。与PCR检测方法相比,本发明的方法省去了产物电泳验证过程,避免了假阳性结果出现,提高检测的准确度。与qPCR相比,本发明的方法简便易行,也不需要操作复杂的仪器设备,节约了成本,提高了检测效率,同时便于在大范围内推广使用。与其他恒温扩增方法相比,本发明的检测方法所需时间更短,检测的准确率更高。

    一种呼吸道发热病原体多联荧光PCR检测试剂盒

    公开(公告)号:CN109055607A

    公开(公告)日:2018-12-21

    申请号:CN201810305134.2

    申请日:2018-04-08

    申请人: 陈思

    发明人: 陈思

    摘要: 本发明公开了一种呼吸道发热病原体多联荧光PCR检测试剂盒,包括PCR扩增试剂和对照试剂,所述的PCR扩增试剂由PCR反应缓冲液A、酶系B和各种病原体引物探针混合液构成,所述的对照试剂主要由阴性对照和阳性对照组成,所述的PCR反应缓冲液A的成分为5*Buffer,2.5mM dNTPs,所述的酶系B主要由HotStart Hi Taq DNA聚合酶、M‑MLV反转录酶和RNA酶抑制剂构成,所述的12种呼吸道发热病原体检测引物探针包含甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、甲型流感病毒H1N1(2009)、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、人副流感1型、人副流感2型和人副流感3型检测引物探针。本发明具有灵敏度高、使用方便等优点。

    一种检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒及检测方法

    公开(公告)号:CN109022613A

    公开(公告)日:2018-12-18

    申请号:CN201810372149.0

    申请日:2018-04-24

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/686 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒,包括PCR反应缓冲液1、引物探针混合液2、酶系3、阴性对照和阳性对照,所述的引物探针混合液2是由一对引物和一条特异性荧光探针组成,所述的引物序列包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4,所述的荧光探针的序列包括SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。与现有技术相比:本发明提供的猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT‑PCR检测试剂盒,较传统的病毒分离、单RT‑PCR和血清型分型方法快捷,可以一次性鉴定欧洲型和美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒中的任何一种,以便于对疫病情况及区域、环境做出及时快捷的检测,以最短的时间做出正确的检测结果。