公开(公告)号：EP3194960A1

公开(公告)日：2017-07-26

申请号：EP15841561.2

申请日：2015-09-21

申请人： The Royal Institution for the Advancement of Learning / McGill University ,  Université de Montréal

发明人： LAPORTE, Stéphane Alain ,  NAMKUNG, Yoon ,  BOUVIER, Michel ,  LE GOUILL, Christian ,  HOGUE, Mireille ,  LUKASHEVA, Viktoriya ,  KOBAYASHI, Hiroyuki ,  DEBLOIS, Denis ,  DURETTE, Etienne

IPC分类号： G01N33/53 ,  C12M1/34 ,  C12N15/62 ,  C12Q1/02 ,  C12Q1/66 ,  G01N33/58

CPC分类号： C07K14/723 ,  C07K2319/60 ,  G01N33/5035

摘要： Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) biosensors for assessing the intracellular localization, internalization and trafficking into cellular compartments of proteins such as receptors, and other biomolecules such as second messengers, are disclosed. These biosensors, which are dependent on the concentration/density of the BRET donor and acceptor in cellular compartments rather that specific protein-protein interactions, use a Renilla GFP/Luc BRET pair, which allows the robust and reproducible monitoring of protein trafficking/localization, with a sensitivity compatible with high-throughput screening (HTS). The use of these biosensors for various applications, including assessing/monitoring protein endocytosis, recycling and intra-cellular trafficking, receptor maturation/rescue by pharmacological chaperones, various endocytosis/exocytosis processes, activation/inhibition, as well as biomolecule concentration/density in different cellular compartments, is also disclosed.

摘要翻译： 公开了生物发光共振能量转移（BRET）生物传感器，用于评估细胞内定位，内化和运输到蛋白质如受体和其他生物分子如第二信使的细胞区室中。 这些生物传感器依赖于细胞区室中BRET供体和受体的浓度/密度而非特定的蛋白质 - 蛋白质相互作用，使用Renilla GFP / Luc BRET对，其允许对蛋白质运输/定位的稳健和可重现的监测， 灵敏度与高通量筛选（HTS）兼容。 将这些生物传感器用于各种应用，包括评估/监测蛋白质内吞作用，再循环和细胞内运输，通过药理学分子伴侣的受体成熟/拯救，各种内吞作用/胞吐作用过程，活化/抑制以及不同细胞区室中的生物分子浓度/密度 ，也被披露。

公开(公告)号：EP3697934A1

公开(公告)日：2020-08-26

申请号：EP18868173.8

申请日：2018-10-15

申请人： Université de Montréal ,  Domain Therapeutics

发明人： LE GOUILL, Christian ,  BOUVIER, Michel ,  LUKASHEVA, Viktoriya ,  HOGUE, Mireille ,  BRETON, Billy

IPC分类号： C12Q1/6897 ,  C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/02 ,  G01N33/566

公开(公告)号：EP3207052B1

公开(公告)日：2020-09-30

申请号：EP15851395.2

申请日：2015-10-14

申请人： Université de Montréal

发明人： BOUVIER, Michel ,  LE GOUILL, Christian ,  HOGUE, Mireille ,  LUKASHEVA, Viktoriya

IPC分类号： C07K14/72 ,  C07K14/47 ,  C07K19/00 ,  C12N15/12 ,  C12N15/62 ,  G01N33/53 ,  C12Q1/66 ,  C12N9/02 ,  G01N21/64 ,  G01N33/542 ,  G01N33/566

公开(公告)号：EP3207052A1

公开(公告)日：2017-08-23

申请号：EP15851395.2

申请日：2015-10-14

申请人： Université de Montréal

发明人： BOUVIER, Michel ,  LE GOUILL, Christian ,  HOGUE, Mireille ,  LUKASHEVA, Viktoriya

IPC分类号： C07K14/47 ,  C07K19/00 ,  C12N15/12 ,  C12N15/62 ,  G01N33/53

摘要： Resonance energy transfer (RET)- or protein-fragment complement assay (PCA)-based biosensors useful for assessing the activity of G-proteins are described. These biosensors are based on the competition between the Got subunit and a Gβγ interacting protein (βγ IP) for the binding to the Gβγ dimer. These biosensors comprises (1) a βγ IP and (2) a Gβ or Gγ protein; a GPCR; or a plasma membrane targeting domain, fused to suitable RET or PCA tags. Methods using such biosensors for different applications, including the identification of agents that modulates G-protein activity or for the characterization of GPCR signaling/regulation, such as G-protein preferences and activation profiles of GPCRs, are also described.

摘要翻译： 描述了用于评估G蛋白活性的共振能量转移（RET） - 或蛋白片段补体分析（PCA）的生物传感器。 这些生物传感器是基于Got亚基和Gβγ相互作用蛋白（βγIP）之间与Gβγ二聚体结合的竞争。 这些生物传感器包含（1）βγIP和（2）Gβ或Gγ蛋白; GPCR; 或质膜靶向结构域，与合适的RET或PCA标签融合。 还描述了使用这种生物传感器用于不同应用的方法，包括鉴定调节G蛋白活性的试剂或GPCR信号传导/调节的表征，例如G蛋白偏好和GPCR的活化概况。