公开(公告)号：JP2016519318A

公开(公告)日：2016-06-30

申请号：JP2016513871

申请日：2014-05-13

申请人： メディシナル バイオコンバージェンス リサーチ センター ,  メディシナル バイオコンバージェンス リサーチ センター

发明人： チョンウォン イ ,  チョンウォン イ ,  ソンフン キム ,  ソンフン キム ,  ソヒ ナム ,  ソヒ ナム ,  テギュ キム ,  テギュ キム

IPC分类号： G01N33/50 ,  C12Q1/02 ,  G01N33/15

CPC分类号： G01N33/573 ,  C12Q1/6886 ,  C12Q2600/112 ,  C12Q2600/136 ,  C12Q2600/158 ,  G01N33/5011 ,  G01N33/574 ,  G01N33/57419 ,  G01N2333/4704 ,  G01N2333/9015 ,  G01N2500/00 ,  G01N2500/04 ,  G01N2500/10

摘要： 本発明は、3次元コラーゲンゲル環境で培養された癌細胞株でリジル-tRNA合成酵素(lysyl-tRNA synthetase;KRS)の作用を分析して、癌転移抑制剤のスクリーニングおよび癌細胞の癌細胞塊からの離脱、上皮-中胚葉細胞転移(epithelial- mesenchymal transition)、移動、浸潤、および転移のモニターリング方法に関するもので、詳細にはHCT116細胞株を含む、多様な大腸癌細胞を用いてKRSを発現するか、または発現しないように調節された細胞株や回転楕円体(spheroid)塊細胞株を作製し、2次元的な環境で培養する場合、KRSの発現を抑制する細胞株で不完全な上皮-中間葉細胞転移表現型(incomplete epithelial-to-mesenchymal transition phenotype;incomplete ECM phenotype)が誘導され、これはKRSの発現抑制が細胞-細胞外基質(extracellular matrix;ECM)付着および細胞-ECM信号伝達活性を抑制することを確認した。また、前記作製された回転楕円体細胞株を水溶性環境または3次元コラーゲンゲル培養環境で培養した場合、KRSの発現抑制は、中間葉細胞に細胞を誘導するが、これは細胞-細胞付着の瓦解につながらず、細胞-ECM付着およびそれに関連した信号活性を抑制することにより、3次元コラーゲンゲル培養環境で培養した回転楕円体細胞から離脱の抑制をもたらし、細胞の微細環境内に存在するTGFβ1による細胞の離脱を誘導しないことを確認することにより、癌転移抑制剤のスクリーニングおよび癌細胞の移動、浸潤、および転移のモニターリング方法に用いることができ、これは薬物開発に必要な前臨床実験時の低コスト高効率の付加価値を創出し得るスクリーニング方法の一つとして有用に用いられる。

摘要翻译： 本发明中，三维胶原凝胶培养的环境的癌细胞系与赖氨酰-tRNA合成酶（赖氨酰-tRNA合成酶; KRS）来分析癌细胞大量筛选的癌转移抑制剂的作用和癌细胞 撤出上皮 - 中胚层细胞迁移（上皮间质转变），运动，侵袭和涉及监测转移的方法，特别是包括HCT116细胞系，使用各种结肠癌细胞的KRS 或表达，或以制备调节细胞系或球状体，以不表达（球状体）的质量的细胞系，培养时在2维环境，KRS的表达不完全抑制细胞系 诱导的;（不完全ECM表型不完全的上皮 - 间充质转换的表型），但这种抑制KRS的细胞的表达 - 细胞外基质 - 上皮中间叶细胞转移表型（细胞外基质; ECM）附着和细胞-ECM信号 抑制传输活动 我很肯定。 此外，当培养的球状体的细胞系在水性环境中的所制造的或三维胶原凝胶培养环境，KRS的沉默是诱导细胞在中间叶细胞，其细胞 - 细胞附着 不会导致倒塌，通过抑制细胞-ECM粘附和在3D胶原凝胶培养环境中培养球形细胞的撤回抑制其相关联的信号活动的结果，存在于细胞中的微环境TGFβ1 通过确认没有由癌转移抑制剂，侵袭的筛选和癌细胞的运动诱导的细胞的分离，并且它可以在监测转移，这需要临床前实验药物开发的方法中使用 它被有效地用作能够产生的低成本高效率时附加值的筛选方法。