公开(公告)号：US20050037475A1

公开(公告)日：2005-02-17

申请号：US10753078

申请日：2004-01-08

申请人： David Reifsnyder ,  Duane Inlow ,  Glenn Dorin ,  Patricio Riquelme ,  Cynthia Cowgill ,  Douglas Bolesch ,  Mark Gustafson

发明人： David Reifsnyder ,  Duane Inlow ,  Glenn Dorin ,  Patricio Riquelme ,  Cynthia Cowgill ,  Douglas Bolesch ,  Mark Gustafson

IPC分类号： A61K38/00 ,  C07K5/103 ,  C07K14/81 ,  C12N9/99

CPC分类号： C07K5/1008 ,  A61K38/00 ,  C07K5/1013 ,  C07K14/8114

摘要： Highly purified preparations of TFPI or TFPI analogs can be prepared using a method that generally involves the following steps: (1) expression of TFPI or TFPI analog in E. coli, (2) isolation of refractile bodies, (3) dissolution of the refractile bodies and refolding of the expressed TFPI or TFPI analog, (4) SP-Sepharose fast flow (FF) chromatography, (5) a first concentration and diafiltration step, (6) Q-Sepharose high (HP) performance chromatography, (7) butyl hydrophobic interaction chromatography (HIC), (8) SP-Sepharose HP chromatography, and (9) a second concentration/diafiltration step. Less than about 12% of the TFPI or TFPI analog molecules in such preparations are modified TFPI or TFPI analog species (i.e., oxidized, carbamylated, acetylated, deamidated, aggregated, or misfolded species).

摘要翻译： TFPI或TFPI类似物的高度纯化制剂可以使用通常包括以下步骤的方法制备：（1）在大肠杆菌中表达TFPI或TFPI类似物，（2）分离折射体，（3）折射体的溶解 （4）SP-Sepharose快速流动（FF）色谱法，（5）第一次浓缩和渗滤步骤，（6）Q-Sepharose高（HP）性能色谱法，（7）表征TFPI或TFPI类似物的体内和重折叠，（4） 丁基疏水相互作用层析（HIC），（8）SP-Sepharose HP层析，和（9）第二次浓缩/渗滤步骤。 在这种制剂中，小于约12％的TFPI或TFPI类似物分子是修饰的TFPI或TFPI类似物（即氧化的，氨基甲酰化的，乙酰化的，脱酰胺的，聚集的或错误折叠的物种）。