公开(公告)号：WO2004001067A3

公开(公告)日：2004-07-29

申请号：PCT/DE0302124

申请日：2003-06-22

Applicant: STIFTUNG A WEGENER INST POLAR ,  MEDLIN CRAWFORD LINDA ,  KERKMANN KATJA ,  LANGE MARTIN

Inventor： MEDLIN CRAWFORD LINDA ,  KERKMANN KATJA ,  LANGE MARTIN

IPC: C12Q1/68 ,  B01L3/00

CPC classification number: C12Q1/6825 ,  C12Q1/6895 ,  C12Q2537/162 ,  C12Q2537/125

Abstract: The invention relates to sequence-specific capture probes for detecting toxic algae by means of selective hybridisation of a complementary nucleic acid sequence which unequivocally characterises the algae to be detected and is in the form of special base sequences which bind to complementary sequences of the rRNA of the small 18S sub-unit or the large 28S sub-unit of the algae-specific ribosome or the single-strand DNA. The invention also relates to an electrochemical detection method for rapidly detecting toxic algae in situ in a liquid sample using at least one immobilised, sequence-specific capture probe (7). According to the inventive method, an auxiliary probe (12) is used to enable or to improve a sandwich hybridisation of the nucleic acid sequence (10) which is characteristic of the algae, and a marked detector probe (11) is used to easily identify said sandwich hybridisation. Both additional probes (11, 12) are located close to the sequence-specific capture probe (7) with as small a distance as possible between sequences, with a maximum difference of between 150 and 200 bases. The invention further relates to an arrangement for carrying out the detection method said arrangement comprising a complete set of disposable biosensor chips (1) which have a three-electrode system (4, 5, 6) and are pre-coated by the corresponding capture probes, and a hand-held display appliance and to the use of said arrangement as an early warning system for toxic algae.

Abstract translation: 本发明涉及一种序列特异性Fangersonden用于通过互补，待检测藻类清楚地表征以特定于小18S的rRNA或大28S亚基的互补序列的藻类的特定碱基序列的形式的核酸序列的选择性杂交的检测有毒藻类的 结合核糖体或单链DNA。 本发明的另一个目的是使用至少一个固定的序列特异性捕获探针（7），用于在液体样品中快速现场检测有毒藻类的电化学检测方法。 这里，辅助探针（12），用于使能或改进，并且易于识别夹心杂交的经标记的检测探针（11）是海藻化特性Nukleinsäsequenz（10），其中两个附加的探针（11,12），用尽可能小的序列距离最大用 的150〜200接近序列特异性捕获探针（7）的碱基差异。 本发明的进一步的目的是用于执行该检测处理的装置 - 在这种情况下预涂Einwegbiosensorchips（1）是在一个完整的组与具有三个电极系统中的相应捕获探针（4，5，6）和指示手持机INCO经受 - 和使用该装置的作为 对有毒藻类预警系统。

公开(公告)号：WO2004001067A2

公开(公告)日：2003-12-31

申请号：PCT/DE2003/002124

申请日：2003-06-22

Applicant: STIFTUNG ALFRED-WEGENER-INSTITUT FÜR POLAR- UND MEERESFORSCHUNG ,  MEDLIN CRAWFORD, Linda ,  KERKMANN, Katja ,  LANGE, Martin

Inventor： MEDLIN CRAWFORD, Linda ,  KERKMANN, Katja ,  LANGE, Martin

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6825 ,  C12Q1/6895 ,  C12Q2537/162 ,  C12Q2537/125

Abstract: Die Erfindung bezieht sich auf sequenzspezifische Fangersonden zur Detektion von toxischen Algen durch selektive Hybridisierung einer komplementären, die zu detektierende Alge eindeutig charakterisierenden Nukleinsäuresequenz in Form von speziellen Basensequenzen, die an komplementäre Sequenzen aus der rRNA der kleinen 18S- oder der grossen 28S-Untereinheit des algenspezifischen Ribosoms oder der einzelsträngigen DNA binden. Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein elektrochemisches Nachweisverfahren zur schnellen Vor-Ort-Detektion von toxischen Algen in einer flüssigen Probe unter Verwendung zumindest einer immobilisierten, sequenzspezifischen Fängersonde (7). Dabei werden eine Helfersonde (12) zur Ermöglichung oder Verbesserung und eine markierte Detektorsonde (11) zur einfacheren Erkennung einer Sandwich hybrid isierung der algencharakteristischen Nukleinsäsequenz (10) eingesetzt, wobei beide zusätzlichen Sonden (11, 12) mit einem möglichst geringen Sequenzabstand mit einer maximalen Differenz von 150 bis 200 Basen nahe bei der sequenzspezifischen Fängersonde (7) liegen. Weitere Gegenstande der Erfindung sind eine Anordnung zur Durchführung des Nachweisverfahrens - hierbei werden in ein komplettes Set mit den entsprechenden Fängersonden vorbeschichtete Einwegbiosensorchips (1) mit einem Dreielektrodensystem (4, 5, 6) und ein anzeigendes Handgerät einbe zogen - und eine Verwendung der Anordnung als Frühwarnsystem vor toxischen Algen.

Abstract translation: 本发明涉及一种序列特异性Fangersonden用于通过互补，待检测藻类清楚地表征以特定于小18S的rRNA或大28S亚基的互补序列的藻类的特定碱基序列的形式的核酸序列的选择性杂交的检测有毒藻类的 结合核糖体或单链DNA。 本发明的另一个目的是使用至少一个固定的序列特异性捕获探针（7），用于在液体样品中快速现场检测有毒藻类的电化学检测方法。 这里，辅助探针（12），用于使能或改进，并且易于识别夹心杂交的经标记的检测探针（11）是海藻化特性Nukleinsäsequenz（10），其中两个附加的探针（11,12），用尽可能小的序列距离最大用 的150〜200接近序列特异性捕获探针（7）的碱基差异。 本发明的进一步的目的是用于执行该检测处理的装置 - 在这种情况下预涂Einwegbiosensorchips（1）是在一个完整的组与具有三个电极系统中的相应捕获探针（4，5，6）和指示手持机INCO经受 - 和使用该装置的作为 对有毒藻类预警系统。

公开(公告)号：WO2002029405A3

公开(公告)日：2002-04-11

申请号：PCT/DE2001/003803

申请日：2001-09-30

Applicant: STIFTUNG ALFRED-WEGENER-INSTITUT FÜR POLAR- UND MEERESFORSCHUNG ,  ESCHBACH, Erik ,  MEDLIN CRAWFORD, Linda

Inventor： ESCHBACH, Erik ,  MEDLIN CRAWFORD, Linda

IPC: G01N33/50

Abstract: Das Verfahren (ELA) basiert auf dem Lyse-Detektions-Prinzip, führt aber eine hocheffiziente Parallelverarbeitung der zu testenden Substanz (TS, AP) in μl-kleinen Einzelvolumina unterschiedlicher Ausbildungsformen (CV, SV) ein, die matrizenförmig (MPC, MPV) angeordnet sein können. Dadurch ergibt sich ein hoher Probendurchsatz verbunden mit einer entsprechend hohen Verfahrensökonomie und -sicherheit. In Ausführungsformen arbeitet das erfindungsgemässe Verfahren bei einer Absorptionswellenlänge von 414 nm, wodurch eine gegenüber bekannten Verfahren um ca. das Zehnfache gesteigerte Empfindlichkeit erreicht wird. Das erfindungsgemässe Verfahren lässt sich einfach automatisieren und damit kommerziell in Anwendungen sowohl als Test-, als Frühwarn- oder auch als Screeningsystem umsetzen.

公开(公告)号：WO0229405A2

公开(公告)日：2002-04-11

申请号：PCT/DE0103803

申请日：2001-09-30

Applicant: STIFTUNG A WEGENER INST POLAR ,  ESCHBACH ERIK ,  MEDLIN CRAWFORD LINDA

Inventor： ESCHBACH ERIK ,  MEDLIN CRAWFORD LINDA

IPC: G01N33/50 ,  G01N33/80 ,  G01N33/487

CPC classification number: G01N33/80 ,  G01N33/5014

Abstract: The method according to the invention (ELA) is based on a lysis-detection principle, however, allows for a highly efficient parallel treatment of the substance to be tested (TS, AP) in individual volumes in the mu l range that may have different shapes (CV, SV) and can be arranged in the form of a matrix (MPC, MPV). The inventive method allows for a high throughput of samples and renders the method highly economical and reliable. In an embodiment, the method is carried out at an absorption wavelength of 414 nm, thereby achieving a sensitivity that is approximately 10 times superior to known methods. The inventive method can also be easily automated and can be used on a commercial basis as a test, early warning or screening system.

Abstract translation: 已知测试程序通过测量预定波长的光的吸收基于该释放的血红蛋白的红细胞和随后的光度测定的裂解（该结构的细胞的分辨率）的基本原理。 该已知的方法，但是，在单个和大的反应容器，并用单独的测量的比色皿中进行。 到einzusetzender设备的工作进行测试的物质，尤其是用于制造和测试的时间来取得有意义的成果是非常高的。 基于的检测原理的裂解本发明的方法（ELA），但引入了在亩-1-小不同的实施例（CV，SV），矩阵形式（MPC，MPV的各个卷待测试的物质的高效并行处理（TS，AP） ）可以设置。 由此，高样品通量的结果与相应的高工艺经济性和安全性关联。 在本发明方法的实施例在414纳米，大约10倍增加的灵敏度相对于已知的方法，由此实现具有吸收波长进行操作。 本发明的方法可以很容易地自动化，并且商业上实现既作为测试，预警或作为应用程序的筛选系统。