一种酶拆分制备(R)-6-羟基-8-氯辛酸乙酯的方法，属于生物催化技术领域。本发明利用脂肪酶拆分底物外消旋6-羟基-8-氯辛酸乙酯，制备(R)-6-羟基-8-氯辛酸乙酯，首先筛选出立体选择性较好的脂肪酶，然后对酶拆分的一系列转化条件如摇床转速，反应温度，反应pH，底物浓度以及表面活性剂或有机辅溶剂的添加进行优化，产物光学纯度达到93.8%，收率达到46.7%。同时利用6-羟基-8-氯辛酸乙酯和6-羟基-8-氯辛酸在不同pH下的溶解度差异，对产物进行了初步分离，分离后得到的粗品中(R)-6-羟基-8-氯辛酸乙酯的含量为83.4%，提取收率为92.4%。(R)-6-羟基-8-氯辛酸乙酯是制备(R)-硫辛酸的中间体，本发明为(R)-硫辛酸的制备提供一条可行的途径。