一种半连续发酵生产生物丁醇的方法

    公开(公告)号:CN102286547B

    公开(公告)日:2013-06-12

    申请号:CN201110236851.2

    申请日:2011-08-18

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 倪晔 孙志浩 王云

    Abstract: 一种半连续发酵生产生物丁醇的方法,属于生物工程技术领域。本发明涉及半连续发酵方法,以糖丁酸梭菌(Clostridiumsaccharobutylicum)DSM13864发酵甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜及木质纤维素水解糖浆等糖质原料制备生物丁醇过程中的应用。本发明方法可获得较高的溶剂产量和溶剂生产强度;只需一次灭菌和接种,节约了反复洗罐、灭菌等非发酵时间,缩短了生产周期,大大提高了设备的利用率;且发酵设备简单,易于自动化控制,适用于工业化。

    一种酶法制备蔗糖-6-乙酸酯的方法

    公开(公告)号:CN101886100A

    公开(公告)日:2010-11-17

    申请号:CN201010230516.7

    申请日:2010-07-12

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 郑璞 孙志浩 王勍

    Abstract: 一种酶法制备蔗糖-6-乙酸酯的方法,属于生物催化技术领域。本发明方法为在非水介质叔丁醇-二甲亚砜体系中,脂肪酶催化蔗糖与乙酸乙烯酯进行转酯反应,合成蔗糖-6-乙酸酯。本发明具有反应条件温和,反应选择性好,反应产物单一,转化率高,产品安全等优点,为生物法制备蔗糖-6-乙酸酯提供了新的可行途径。

    一种高通量筛选谷氨酸高产菌株的方法

    公开(公告)号:CN101735971A

    公开(公告)日:2010-06-16

    申请号:CN201010018137.1

    申请日:2010-01-12

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种高通量筛选谷氨酸高产菌株的方法,属于发酵工程技术领域。高产菌株的筛选一直是产谷氨酸菌种选育的瓶颈。传统的筛选方法是从平板上挑取单菌落,然后通过试管或小摇瓶发酵初筛,再进行摇瓶发酵复筛。本发明对传统的筛选进行了改良,根据高产谷氨酸菌株的特点,在平板上挑取单菌落,用微孔细胞培养板进行初筛,摇瓶发酵复筛。本发明方法有效地增加了每次筛选的菌落数量,降低筛选工作强度,提高了整个筛选工作的效率。

    利用菊芋原料发酵生产丁二酸的方法

    公开(公告)号:CN101532036A

    公开(公告)日:2009-09-16

    申请号:CN200810007470.5

    申请日:2008-03-11

    Inventor: 过鑫富 孙志浩

    Abstract: 本发明提供了一种利用廉价菊芋原料发酵生产丁二酸的方法。本发明还提供一种菊芋原料在制备丁二酸中的应用。本发明同时提供琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)在以菊芋为原料制备丁二酸的方法中的应用。本发明的方法利用可再生原料,对环境友好,可缓解化学合成丁二酸的石化资源紧张问题,也能够显著体现发酵可以不与人争粮、不与粮争地的优点,这不仅减少了发酵的培养基成本,并且能缓解粮食作为发酵原料的不足,还能解决大量荒原沙漠滩涂等边际土地的开发利用问题,有利环境,增加农民收入,利于农业与农村建设。

    一种粗酶制剂及其生物转化制备香草醛的方法

    公开(公告)号:CN1600853A

    公开(公告)日:2005-03-30

    申请号:CN03157579.X

    申请日:2003-09-25

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 孙志浩

    Abstract: 本发明涉及由植物提取的含脂氧合酶的粗酶制剂,及用其转化丁香酚或异丁香酚制备香草醛的方法,该方法利用大豆提取酶,用于天然丁香油原料制取的异丁香酚的生物转化,转化2~3d,转化液中含香草醛1~3g/L,对消耗底物的摩尔转化率80%以上,未转化的异丁香酚容易回收,可用于再次转化,对底物总摩尔转化率70%以上,提取得率为75~80%,产品纯度95%以上。本发明的转化工艺可以直接用大豆粗提取酶液添加异丁香酚进行转化,也可以用制备的冻干粉,或其固定化粗酶加异丁香酚底物溶液进行转化,固定化酶可反复利用多次。

    一株产精氨酸脱亚胺酶的重组菌的构建及其定向改造方法

    公开(公告)号:CN102061283B

    公开(公告)日:2012-08-22

    申请号:CN201010572851.5

    申请日:2010-12-05

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 倪晔 孙志浩 郑璞

    Abstract: 一株产精氨酸脱亚胺酶(ADI)的重组菌的构建及其定向改造方法,属于医药生物工程技术领域。其中包括:采用PCR方法,扩增变形假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)CGMCCNo.2039的ADI编码基因arcA,构建ADI重组表达菌种,对该重组ADI酶进行酶学性质研究,其Km为2.88mmol/L(pH6.0),最适反应pH为6.0,比酶活为20.85U/mg,当pH升高至生理pH(7.4)时,比酶活下降超过90%。采用易错PCR突变技术,对该重组ADI酶进行定向改造以提高其在生理中性条件pH下的活性及底物亲和力。通过一轮定向改造,筛选获得一株优良的突变株ADIM314,ADIM314酶和野生酶相比:其生理pH条件下比酶活提高20倍以上,Km值下降至0.65mmol/L(pH7.4),最适反应pH从6.0提高至6.5。

    一株产精氨酸脱亚胺酶的重组菌的构建及其定向改造方法

    公开(公告)号:CN102061283A

    公开(公告)日:2011-05-18

    申请号:CN201010572851.5

    申请日:2010-12-05

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 倪晔 孙志浩 郑璞

    Abstract: 一株产精氨酸脱亚胺酶(ADI)的重组菌的构建及其定向改造方法,属于医药生物工程技术领域。其中包括:采用PCR方法,扩增变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)CGMCC No.2039的ADI编码基因arcA,构建ADI重组表达菌种,对该重组ADI酶进行酶学性质研究,其Km为2.88mmol/L(pH6.0),最适反应pH为6.0,比酶活为20.85U/mg,当pH升高至生理pH(7.4)时,比酶活下降超过90%。采用易错PCR突变技术,对该重组ADI酶进行定向改造以提高其在生理中性条件pH下的活性及底物亲和力。通过一轮定向改造,筛选获得一株优良的突变株ADIM314,ADIM314酶和野生酶相比:其生理pH条件下比酶活提高20倍以上,Km值下降至0.65mmol/L(pH7.4),最适反应pH从6.0提高至6.5。

    连续发酵或半连续发酵生产丁二酸的方法

    公开(公告)号:CN101302546B

    公开(公告)日:2011-04-13

    申请号:CN200810123545.6

    申请日:2008-06-06

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 连续发酵或半连续发酵生产丁二酸的方法,属于生物工程技术领域。本发明提供琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)在以甘蔗糖蜜、玉米淀粉糖浆、菊芋水解糖浆、甜高粱秸秆糖浆及纤维质木质原料水解糖浆等碳水化合物原料连续或半连续制备丁二酸方法中的应用。本发明的方法利用多级连续发酵或两级半连续发酵可以提高菌体浓度和细胞活力,可获得高的丁二酸产量和高的丁二酸生产强度;容易实现自动化、连续化操作;较分批发酵可节约反复洗罐、灭菌等非发酵时间,因而生产效率可以大大提高;利用半连续发酵生产丁二酸较连续发酵更容易控制发酵参数,糖利用率、目标产物产率和目标产物产量高,设备及操作简单易行,适合工业化生产。

    琥珀酸放线杆菌菌种改组、选育方法以及用其发酵生产丁二酸的方法

    公开(公告)号:CN101531972B

    公开(公告)日:2010-12-01

    申请号:CN200810146688.9

    申请日:2008-09-05

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明涉及一株具有较强钠离子耐受性和产酸性能的琥珀酸放线杆菌Actinobacillus succinogenes CGMCC No.2653(即F3-10),该菌株的选育方法及用其发酵生产丁二酸的方法。以琥珀酸放线杆菌CGMCC No.1593作为出发菌株,分别对其进行X-射线、紫外线诱变和硫酸二乙酯(EMS)、亚硝基胍(NTG)化学诱变,筛选得到具有改良的发酵产酸性能,特别是钠离子耐受性有改良三株菌株X-8、UV-17、SE-6,和具有氟乙酸抗性的高产菌株SF-9,将它们用基因组改组方法选育得到高产、耐钠、抗氟乙酸的菌株F3-10。该菌株F3-10以甘蔗糖蜜为原料,采用Na2CO3控制发酵pH,在5L发酵罐中进行补料分批发酵,48h产丁二酸53.96g/L,对消耗糖产率89.2%,糖利用率94.0%,丁二酸比杂酸为6.58∶1,较出发菌CGMCC No.1593有显著提高。

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