本发明公开了一种烟草开花期调控基因NtMADS2及其克隆方法与应用。所述烟草开花期调控基因NtMADS2包含的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；其编码的多肽包含的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。在烟草中敲低NtMADS2基因的表达可延迟烟草的开花期，另外，通过比对NtMADS2蛋白质序列，寻找相同功能的同源基因，并利用VIGS技术验证同源基因的功能。因此，NtMADS2基因具有广阔的应用前景。本发明的烟草开花期调控基因为烟草优化开花时期育种提供基因与技术的支持。