昆虫细胞表达sST2做为测定血清中sST2浓度的校准品
摘要:
本发明属于生物技术领域。公开了用昆虫细胞表达可溶性生长刺激表达蛋白2做为ELISA测定血清中sST2浓度的校准品过程,此方法步骤如下:提取T47D细胞RNA,用于合成cDNA,用PCR扩增出sST2DNA;用sST2 DNA构成pFastBac‑Flag‑sST2载体,再转导入HD10Bac细菌株,产生重组Flag‑sST2昆虫病毒质粒;把Flag‑sST2AcNPV质粒DNA转导进昆虫细胞,产生重组Flag‑sSt2AcNPV;用Flag‑sST2 AcNPV感染SF9细胞,表达出Flag‑sST2蛋白,用Anti‑Flag M2 affinity agarose纯化出具有自然结构和抗原性Flag‑sST2;用Flag‑sST2作为校准品,建立双夹心酶联免疫法,测定血清或其它液体中sST2浓度,此发明制备出具有蛋白自然结构和抗原性Flag‑sST2,做为测定液体中sST2浓度的校准品,用于临床检测血清中sST2浓度。
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