本发明公开了一种GITR基因人源化动物模型的制备方法及应用。本发明还保护一种能够特异的靶向Gitr基因的sgRNA序列、一种多基因人源化动物模型的制备方法以及相关应用。本发明提供了一种适合人源细胞或组织移植的工具小鼠，一种新的人源化动物模型制备方法，有利于相关疾病的研究，为生物医学实验的开展提供了有效的技术手段。本发明还涉及人源化基因改造非人动物，特别是基因改造啮齿动物，但尤其是基因改造小鼠，具体涉及人源化GITR基因动物模型的构建方法及其在生物医药领域的应用。