本发明提供了一种头孢菌素酰化酶的固定化方法，属于酶的固定化技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将桥接体溶液滴加到载体溶液中，进行第一缩合反应2～5h后，进行第一固液分离，收集固相组分，获得带桥接体的载体；2)将步骤1)获得的带桥接体的载体与头孢菌素酰化酶水溶液混合搅拌得到混合料液，向所述混合料液中滴加三乙氨进行第二缩合反应20～40h后，进行第二固液分离，收集固相组分为固定化的头孢菌素酰化酶；所述桥接体为主链包含2～8个碳原子的卤酰卤；所述载体为氨基树脂。本发明所述方法制备获得的头孢菌素酰化酶酶活性高，稳定性好。