本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及一种活性提高的亮氨酸‑5‑羟化酶突变体及其应用。本发明通过分子生物学手段获得念珠藻(Nostoc punctiforme)NIES‑2108来源的亮氨酸‑5‑羟化酶编码基因，采用反向PCR进行定点突变获得编码突变体的基因，而后将编码突变体的基因进行异源表达获得亮氨酸‑5‑羟化酶的突变体V77A。该突变体以亮氨酸和蛋氨酸为底物时，其相对酶活性较野生型分别提高了69.53％、23.26％。本发明筛选出的活性提高的变异体，可以更高效地使亮氨酸远端的5号碳位实现羟基化，并且可催化蛋氨酸生成蛋氨酸亚砜，为工业上药物中间体的酶法催化生产提供广阔的前景。