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公开(公告)号：CN108660170B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN201810498473.7
申请日：2018-05-23
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明提供了一种酶法降解褐藻多糖生成DEH的方法，分别克隆来源于黄杆菌属(Flavobacterium phragmitis)的褐藻多糖裂解酶Flph(GenBank:WP_091498571.1)和褐藻寡糖酶Flphalx(GenBank:WP_091498561.1)的基因，构建表达载体并分别在大肠杆菌宿主中表达，纯化蛋白得到Flph和Flphalx两种重组酶，将两种重组酶按一定比例复配，以褐藻酸钠为底物转化生成褐藻寡糖和DEH(4‑deoxy‑L‑erythro‑5‑hexoseulose uronic acid)，DEH转化率可以达到85％以上。
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公开(公告)号：CN106995789B
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN201611156766.4
申请日：2016-12-15
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一株白藜芦醇发酵菌及其应用，菌株的分类命名为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13129，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年10月21日，还提供一种白藜芦醇发酵菌在发酵白藜芦醇中的应用。本方法利用微生物转化法直接将虎杖粗药材中的白藜芦醇苷转化为白藜芦醇，方法简单，转化过程容易控制，转化反应专一性和特异性较强，便于产品的分离和纯化，可有效提高白藜芦醇产品的收率和质量，提高产品的附加值。
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公开(公告)号：CN107746833A
公开(公告)日：2018-03-02
申请号：CN201710863361.2
申请日：2017-09-22
申请人： 天津科技大学
CPC分类号： C12N9/0006 , C12N15/70 , C12P33/02 , C12Y101/03006
摘要： 本发明提供一种通过定向改造构建的酶活力提高的胆固醇氧化酶突变体、制备方法与应用，以简单脂肪杆菌(Pimelobacter simplex)TCCC11037基因组为模板克隆出胆固醇氧化酶PsCO基因，构建重组菌株，通过反向PCR和定点突变技术获得酶活力提高的胆固醇氧化酶突变体F70L。获得的胆固醇氧化酶突变体F70L比酶活为33.35U/mg，较野生型提高了163.24％，催化胆固醇生产胆甾4-烯-3-酮的催化效率提高了250％。本发明提供的胆固醇氧化酶突变体的比酶活有较大幅度提高，为今后生物酶法高效催化生产甾体药物提供了理论依据与技术保障，并且也为胆固醇氧化酶在临床上用于胆固醇的检测提供新的思路。
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公开(公告)号：CN106995789A
公开(公告)日：2017-08-01
申请号：CN201611156766.4
申请日：2016-12-15
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一株白藜芦醇发酵菌及其应用，菌株的分类命名为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13129，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年10月21日，还提供一种白藜芦醇发酵菌在发酵白藜芦醇中的应用。本方法利用微生物转化法直接将虎杖粗药材中的白藜芦醇苷转化为白藜芦醇，方法简单，转化过程容易控制，转化反应专一性和特异性较强，便于产品的分离和纯化，可有效提高白藜芦醇产品的收率和质量，提高产品的附加值。
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公开(公告)号：CN116004596B
公开(公告)日：2024-06-04
申请号：CN202211288246.4
申请日：2022-10-20
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明提供了一种D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的耐酸突变体I114R、该突变体酶的基因序列、包含该酶基因序列的重组表达载体以及含有载体的工程菌株。本发明还提供了重组表达载体和工程菌株构建方法，以及利用工程菌株制备该耐酸突变体的方法。本发明耐酸突变体I114R具有优异的活性和酸稳定性，其相对活性较之野生型提高30.7％。耐酸突变体I114R在pH4.5的环境中孵育2h后的相对活性是野生型的9.7倍，甚至在pH3.0的环境下孵育2h后仍能检测到活性。耐酸突变体酶I114R在酸性环境下体现出的优异耐受力和活性能够充分满足D‑阿洛酮糖的生产要求，可应用于D‑阿洛酮糖的工业制糖工艺。
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公开(公告)号：CN117448290A
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202311290863.2
申请日：2023-10-08
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明提供了一种适用于合成熊去氧胆酸的羟基类固醇脱氢酶体系，包含7α‑羟基类固醇脱氢酶突变体和7β‑羟基类固醇脱氢酶突变体。上述两种酶突变体通过部分氨基酸位点的突变改造，改变了辅酶偏好性并改善了利用辅酶的催化活性，能够在催化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸过程中实现NADH反应自循环补给。本发明同时获得了具有上述双酶突变体的重组毕赤酵母菌株。本发明构建的双酶突变体以鹅去氧胆酸为底物，经过中间产物7‑KLCA，高效转化合成为熊去氧胆酸，熊去氧胆酸的产率达到94.05％。本发明可以廉价易得的鹅去氧胆酸为出发底物进行高效生物转化合成高附加值熊去氧胆酸，具有实用且环境友好的特点，同时也解决了辅酶昂贵的问题。
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公开(公告)号：CN117286129A
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202311055397.X
申请日：2023-08-21
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明属于基因工程领域，特别涉及一种D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体及其应用。所述突变体是在SEQ ID NO:1所示瘤胃球菌(Ruminococcus sp.)来源的野生型D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的基础上发生以下突变中的至少一种获得的：K217N、A218L、或L277R。相比于野生型，活性分别提供0.6‑2.2倍不等。本发明突变体具有优异的催化活性，提高了D‑阿洛酮糖生产效率，且固定化后突变体的稳定性较野生型有所提高，对降低生产成本，促进D‑阿洛酮糖的大规模生产及应用具有重要意义。
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公开(公告)号：CN112210551A
公开(公告)日：2021-01-12
申请号：CN202011102727.2
申请日：2020-10-15
申请人： 天津科技大学
IPC分类号： C12N11/089 , C12N9/90 , C12P19/02 , C12P19/24
摘要： 本发明提供了一种D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶固定化酶的制备方法，包括如下步骤：将环氧树脂置于磷酸钾缓冲液中，25℃恒温振荡处理后用超纯水清洗；将D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶加入磷酸钠缓冲液，再加入经步骤1处理后的环氧树脂，25℃恒温振荡反应12h；反应产物用PBS清洗后得到D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶固定化酶。本发明通过环氧树脂E103与D‑阿洛酮糖‑3差向异构酶分子结合进行固定化酶制备，不需要使用戊二醛交联，也不使用任何有毒有害的试剂，制备过程及产品安全无毒害。其次，本发明制备的固定化酶稳定性高，可重复多次使用，在55℃条件下连续反应11批次内固定化酶的酶活性没有明显衰减，应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN110172486A
公开(公告)日：2019-08-27
申请号：CN201910396709.0
申请日：2019-05-14
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明属于基因工程领域，涉及2’-岩藻糖基乳糖的生产方法，尤其是一种利用基因工程菌株与酶共催化合成2’-岩藻糖基乳糖的方法。本发明以高效表达己糖激酶、磷酸甘露糖变位酶、甘露糖-1磷酸鸟苷转移酶的乳酸乳球菌重组菌为生产菌株，以甘露糖为底物，合成GDP-甘露糖，再利用GDP-甘露糖4,6-脱水酶、GDP-4-酮-6-脱氧甘露糖3,5-变旋酶/4-还原酶、α1,2-岩藻糖基转移酶在体外对GDP-甘露糖进行催化，从而合成2’-岩藻糖基乳糖，为工业上生产2’-岩藻糖基乳糖提供了一种新的方法。
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公开(公告)号：CN107245494A
公开(公告)日：2017-10-13
申请号：CN201710499265.4
申请日：2017-06-27
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明属于生物技术和基因工程技术领域，具体为Aβ42在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化方法。本发明构建的Aβ42表达体系提供了原核生物可溶性融合表达人淀粉样蛋白Aβ42的表达载体的构建方法，并将表达载体导入至大肠杆菌表达宿主中，经诱导表达、蛋白酶切、两步纯化及鉴定后获得具有高纯度生物活性的目标Aβ42。本方法所采用的大肠表达系统及融合蛋白，具有表达效率高、表达量大、成本低、易操作等特点，所表达的Aβ42多肽不含任何残基、纯度高、产率高等优点。
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