本发明属于抗菌剂技术领域，具体涉及一种含非天然氨基酸的环状抗菌肽及其制备方法和应用。所述环状抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，为分子内环状多肽，通过非天然氨基酸Dap的侧链与半胱氨酸残基之间成环，形成具有分子内环状结构，其中，序列中含有一个非天然氨基酸Dap，多肽位于β转角处的脯氨酸替换成DPRO‑LPRO来增加β‑转弯的稳定性。本发明抗菌肽其氨基酸序列结构简单、合成方便、抗菌活性高，可用于白色念珠菌引起的疾病的预防与治疗。