本发明提供一种兽用狂犬病灭活疫苗的制备方法及该疫苗包含的稳定剂，制备方法中病毒浓缩流程为：(1)病毒上清液经以0.8～1L/min流速持续透过300KD膜包，体积浓缩至原体积的1/50～1/40得粗浓缩液；(2)向粗浓缩液中加入10～15倍体积的PBS溶液，在浓缩压力为0.5～1.0bar，流速为1.8～2L/min的条件下透过300KD膜包，体积浓缩至透过前的1/4～2/5时调整流速为0.8～1L/min，持续浓缩至所述粗浓缩液原体积。本发明通过优化病毒浓缩流程，针对不同抗原浓度采用不同的膜透过流速，在浓缩过程即可去除30～50％杂蛋白，同时毒价维持在90％以上，制成的疫苗更加稳定、高效。