本发明涉及从万年蒿中提取分离倍半萜内酯类化合物的方法，所述倍半萜内酯类化合物包括：1α‑乙酰基桉叶‑4‑烯6β，11β氢‑12,6内酯；(11S)‑3‑氧络桉烷‑1,4‑(15)‑二烯烃‑12,6α内酯；1‑表去氢异黄酮；11‑表阿霉素；菊花素；1α‑乙酰基加利卡多醇；氰菊酯；1α，4α‑二羟基桉叶‑2‑烯‑5α，6β，11β氢‑12,6‑内酯；牛蒿素；(+)‑去氢催吐萝芙木醇；提取分离方法为：采用硅胶、ODS开放柱和半制备液相色谱等多种色谱方法，对万年蒿的95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化，分离得到上述10个化合物。该提取方法简单，提取效率高，提取的化合物数量多，为倍半萜内酯化合物的药理性研究奠定基础。