本公开属于生物工程技术领域，具体涉及一种HBV cccDNA与宿主互作研究模型构建及应用。本公开提供了一种高度模拟乙型肝炎病毒基因组cccDNA的微环DNA模型构建及其应用，通过构建pmini‑MC‑HBV‑Intron质粒，体外获得高纯度MC‑HBV微环质粒；通过优化嵌合内含子序列和RNA的二级结构，实现了嵌合内含子在RNA水平上的高效可变剪接，获得可体外高水平复制的MC‑HBV。该MC‑HBV可高度模拟HBV病毒与宿主细胞间的生理活动。本公开还建立了体外标记MC‑HBV模型和检测的技术，为揭示HBV cccDNA与宿主相互作用关系、功能调节机制和探寻HBV治疗新靶点的提供了极好的模型。