本发明公开了抗VEGF单域抗体及其人源化、单域抗体和IgG1-Fc构建的融合蛋白和应用。本发明筛选得到一组VEGF的单域抗体，其活性高、具有较强的中和或结合能力。该组单域抗体能特异性结合人VEGF165和VEGF121抗原、结合细胞表面表达VEGF的肿瘤细胞株，有效阻断VEGF抗原与VEGFR结合以及产生相应的信号级联效应。本发明进一步将单域抗体进行人源化改造得到提高亲和力提高的人源化抗体。本发明还将单域抗体或人源化的单域抗体与IgG-Fc构建得到的融合蛋白。本发明的人源化单域抗体和/或融合蛋白可用于检测或诊断VEGF、阻断VEGF与VEGFR之间相互作用以及用于治疗VEGF表达异常相关疾病。